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미생물학
0 조회수 • 2:35 분 • November 28th, 2025
먼저 아가로스 젤 패드 아래에 박테리아를 박히고 단일층 성장을 지원하기 위해 박테리아를 포함한 배양판을 설치하세요.
박테리아는 녹색 형광 단백질을 지속적으로 발현하여 유전자 발현을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.
패드 주변에 추가로 아가로스 젤을 부어 샘플을 밀봉하고 실온에서 고체화시킵니다.
플레이트를 테이프로 밀봉하고, 가스 교환을 위해 천공을 뚫으며, 응축을 막기 위해 뒤집으세요.
젤을 안정시키고 박테리아 분열을 방지하기 위해 저온에서 배양하세요.
다음으로 대물렌즈에 침수유를 바르고 판을 공초점 현미경 스테이지에 올려놓습니다.
타임랩스 촬영 시작.
GFP가 점차 성숙하면서 형광을 내기 시작합니다. 세포 분열 과정에서 이 형광 단백질들이 딸세포 사이에 분포되어 형광 강도가 감소합니다.
이로 인해 톱니형 형광 패턴이 형성되며, 동일한 환경에서 유전적으로 동일한 세포 간 이 패턴의 차이는 유전자 발현에서 생물학적 잡음을 나타냅니다.
샘플을 촬영하려면 플라스크를 물에서 꺼내 젤 용액을 체온까지 식히세요. 샘플 플레이트 가장자리에 젤 3밀리미터를 부었습니다. 아가로스가 굳으면 테이프로 판을 밀봉하고 25게이지 바늘로 여러 구멍을 뚫습니다.
그 후 플레이트를 4도 섭씨에서 거꾸로 30분 이상 올려 아가로스가 완전히 굳어지도록 하여 세포 유사분열을 방지합니다. 24시간 이내에 형광 공초점 현미경을 사용해 가장 낮은 배율로 샘플을 찾고 현미경의 자동 초점 시스템을 작동시키세요. 적절한 대물에 오일을 바르고 플랫폼 컨트롤러로 플레이트를 움직여 오일을 조심스럽게 펴세요.
그 후 자동 초점을 다시 작동시키고 기본 제안인 Z단계 단면을 따라 샘플을 촬영하세요.