0 조회수 • 2:44 분 • March 31st, 2026
상피세포와 고블릿 유사 세포가 함께 배양된 Transwell 삽입물로 시작하세요.
상피세포는 촘촘한 접합부를 형성하는 반면, 잔 모양 세포는 점액을 생성하여 생체 내 장 상피 장벽을 복제합니다.
소장 소화를 모방하기 위해 모의 장액으로 처리된 구강 박테리아 군집의 현탁액을 가져와 보세요.
상부 챔버의 배지를 박테리아 현탁액으로 교체하세요.
박테리아 부착과 내화를 촉진하기 위해 흔들면서 배양하세요.
상부 챔버에 부착되지 않은 박테리아가 포함된 배지를 채취하여 이후 생존 분석 실시를 수행하세요.
점액 용해액을 추가하고 점액을 용해시키고 부착된 박테리아를 방출하도록 배양하세요.
박테리아의 생존력과 부착력을 추가 분석하기 위해 용액을 수집하세요.
세포를 완충제로 세척하고 세제를 넣어 제거하세요.
셀 서스펜션을 수거해.
세포를 용해시키고 내부화된 박테리아를 방출하기 위해 부유액을 소용돌이로 만듭니다.
원심분리기를 통해 상정액과 세포 잔해를 별도로 수집하여 추가 분석을 진행합니다.
텍스트 프로토콜에 따라 소장 소화의 세포 밀도를 세척하고 조정한 후, 트랜스웰 시스템에서 첨단 배지를 제거하고 1.5밀리리터의 박테리아 현탁액을 추가합니다.
일반 세포 배양 조건에서 2시간 동안 시스템을 공동 배양합니다. HBSS에 10밀리몰라 n-아세틸시스테인 0.5밀리리터를 첨가하여 HT29-MTX가 생성하는 점액을 용해시키고 부착된 박테리아를 회수합니다.
플레이트를 37도 섭씨에서 1시간 동안 교반 상태로 배양하세요. NAC-HBSS를 마이크로 원심분리관에서 회수하고, 1밀리리터의 DPBS를 사용해 세포를 두 번 세척합니다. 단층 위에 0.5% 트리톤 X-100을 0.5밀리리터 추가하고, 피펫팅으로 세포를 파괴합니다.
그 후 1분간 소용돌이 상태에서 빠르게 액체를 회수하세요. 세제로 박테리아 세포를 손상시키지 않도록 속도를 조절하는 것이 중요합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 샘플을 분석하세요.
본 프로토콜은 인비트로(in vitro) 장 모델에서 세균의 부착 및 내부화를 평가하는 방법을 보여줍니다. 이는 위장관 건강에 결정적인 세균과 장 상피 세포 간의 상호작용을 이해하는 데 중요합니다.
이 인비트로(in vitro) 장 모델은 마이크로바이옴 표적 치료제 개발에 있어 중요한 세균-숙주 상호작용의 기전적 리스크 제거를 가능하게 합니다. 부착 및 내재화를 정량화함으로써, 전임상 발견 단계에서 표적 검증과 리드 물질 발굴을 지원합니다. 본 시스템은 정량적이고 재현 가능한 결과물을 제공하여 초기 단계 파이프라인 결정의 예측 신뢰도를 높여줍니다.
이 방법은 가설 검증부터 리드 화합물 도출에 이르는 발견 연속체에 통합되어, 화합물 스크리닝 이전에 생물학적 타겟의 리스크를 줄이는 기전적 통찰력을 제공합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026