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미생물학
0 조회수 • 2:22 분 • August 31st, 2026
영양분이 풍부한 배지가 담긴 인간 배아 신장 세포 배양 플라스크로 시작합니다.
세포 내로의 플라스미드 전달을 향상시키기 위해 배지를 chloroquine이 포함된 새 배지로 교체합니다.
인플루엔자 표면 단백질, 렌티바이러스 핵심 단백질 및 렌티바이러스 게놈을 인코딩하는 플라스미드 혼합물과 인산칼슘을 준비합니다. 이를 배양하여 인산칼슘-DNA 복합체를 형성합니다.
혼합물을 세포에 첨가하고 부드럽게 섞습니다. 복합체가 내세포작용(endocytosis)을 통해 세포 내로 진입할 수 있도록 배양합니다. 클로로퀸(Chloroquine)은 플라스미드 DNA의 엔도솜 탈출(endosomal escape)을 촉진합니다.
세포 내부에서 플라스미드 DNA는 인플루엔자 및 렌티바이러스 구성 요소 모두의 발현을 유도합니다.
과잉 복합체를 제거하기 위해 배지를 교체합니다.
바이러스 구성 성분들이 조립되어 유사 바이러스(pseudoviruses) 형태로 출아하고 배양 배지로 방출될 수 있도록 배양합니다.
슈도바이러스가 포함된 배지를 수확하고 원심분리하여 세포 잔해를 침전시킨다.
슈도바이러스(pseudovirus)가 포함된 상층액을 수집하여 후속 분석을 위해 저온에 보관합니다.
먼저, 완전 DMEM 배지에서 HEK 293FT 세포의 단일 세포 현탁액을 만듭니다. 단일 세포 현탁액 10 mL를 T75 플라스크에 넣고 37 °C에서 배양합니다.
트랜스펙션 2시간 전에 기존 배지를 chloroquine이 포함된 신선한 완전 배지 10 mL로 교체합니다. 원고에 설명된 대로 시약과 플라스미드 DNA를 혼합합니다. 그런 다음 이 혼합액을 세포 위의 배지에 옮기고 부드럽게 흔들어 줍니다.
배양 후, 배지를 15 mL의 신선한 완전 DMEM 배지로 교체합니다. 65시간 후, 원심분리를 통해 상층액을 수확합니다. 상층액을 수집하여 분주합니다.