재조합 덴소바이러스 매개 모기 유충 유전자 억제

바이러스 감염에 취약한 초기령 모기 유충을 준비합니다.

탈이온수가 담긴 비커로 유충을 옮깁니다.

표적 유충 유전자를 억제하는 microRNA를 인코딩하도록 설계된 재조합 densovirus를 도입합니다. 배양합니다.

유충이 바이러스를 섭취하면 바이러스가 장에 도달하게 됩니다.

섭취된 바이러스는 장 상피를 통과하여 다른 조직으로 확산됩니다.

바이러스는 내세포작용(endocytosis)을 통해 유충 세포로 진입하여 핵 내로 DNA를 방출합니다.

바이러스 DNA는 microRNA를 생성합니다.

세포질에서 이러한 microRNA는 RNA 유도 침묵 복합체(RNA-induced silencing complex)와 결합합니다.

이 복합체는 상보적인 표적 유충 mRNA에 결합하여 이를 절단함으로써, 발현을 억제하고 유전자 침묵(gene silencing)을 유도합니다.

배양 후, 섭취되지 않은 바이러스 입자를 제거하기 위해 유충을 탈이온수로 세척합니다.

회복을 위해 유충을 먹이가 있는 새 플레이트로 옮깁니다.

표적 유전자가 억제된 바이러스 감염 모기 유충이 준비되었으며, 이를 후속 응용 과정에 사용할 수 있습니다.

탈이온수를 사용하여 1령 A. albopictus 유충 10마리를 3회 세척합니다. 그 후, 유충을 탈이온수 95 milliliters가 담긴 비커로 옮깁니다.

rAaeDV 스톡 5 mL를 첨가하고, 유충을 28 °C에서 24시간 동안 배양합니다. 유충 감염의 성공을 위해서는 높은 감염률을 보장할 수 있도록 유충을 감염 바이러스 입자와 함께 24~36시간 동안 유지하는 것이 필수적입니다. 배양 후, 탈이온수를 사용하여 유충을 세 번 세척한 다음 유충을 다시 플레이트로 옮깁니다. 유충에게 정기적으로 먹이를 공급합니다.