0 조회수 • 3:24 분 • August 31st, 2026
유전 물질이 없는 바이러스 유사 입자인 바이러스 캡시드가 포함된 튜브를 준비합니다.
튜브를 일정 온도에서 다양한 시간 동안 가열합니다.
가열 시간을 짧게 하면 캡시드 단백질에 가벼운 스트레스가 가해지는 반면, 가열 시간을 길게 하면 캡시드가 붕괴되어 응집이 일어납니다.
추가적인 구조적 변화를 방지하기 위해 튜브를 빠르게 냉각합니다.
액체를 파라핀 필름 위로 옮깁니다.
투과전자현미경(TEM) 그리드를 액적 위에 올립니다. 캡시드가 그리드 표면에 부착됩니다.
필터 페이퍼로 그리드를 닦아내어 과잉 액체를 제거합니다.
완충액으로 세척하여 느슨하게 부착된 캡시드를 제거한 후, 그리드를 다시 블롯합니다.
캡시드 표면에 결합하여 TEM 하에서 더 어둡게 보이게 하는 중금속 염색제인 uranyl acetate에 담급니다.
그리드를 닦아내고 플레이트 위에 배치합니다. 습기를 제거하기 위해 플레이트를 데시케이터에 보관합니다.
TEM을 사용하여 그리드를 촬영해 열로 인해 유도된 캡시드 손상을 시각화합니다.
10 mM HEPES (pH 7.4) 대신 PBS를 사용하고 처리 후 캡시드를 추가로 희석하지 않는 것 외에는 이전과 동일하게 열처리를 수행합니다. 다음으로, 처리된 캡시드 용액 15 µL 방울 전체를 파라핀 필름 위에 피펫팅합니다. 핀셋으로 그리드 가장자리를 잡아 고정한 후, 처리된 용액 방울 위에 그리드의 카본 면이 아래로 향하도록 놓습니다.
캡시드가 그리드에 부착될 수 있도록 그리드를 10분 동안 배양합니다. 캡시드 표본의 순도에 따라, 처리된 캡시드 액적 뒤에 10~15 µL의 HEPES 용액 액적을 일렬로 배치하여 세척 과정을 추가합니다. 10분 후, 액적이 묻은 그리드를 들어 올립니다.
그리드를 거름종이에 거의 수직으로 세워 액적을 흡수시킵니다. 그런 다음, 그리드를 사용하여 10에서 15 µL의 HEPES 완충액 액적을 집어 올린 후 30초 동안 유지합니다. 30초 동안 세척한 후, 다른 거름종이 조각으로 다시 흡수시킵니다.
다음으로, 파라핀 필름의 빈 공간에 2% uranyl acetate 용액 15 µL 한 방울을 떨어뜨립니다. 그리드로 uranyl acetate 방울을 집어 올려 45초 동안 유지합니다. 그런 다음, 용액의 대부분이 제거되도록 uranyl acetate를 흡수시켜 제거합니다.
그리드가 핀셋의 수분에 달라붙지 않도록 주의하며 거름종이 위에 그리드의 탄소면이 위로 오게 놓습니다. 그런 다음 그리드가 놓인 거름종이를 열린 유리 페트리 접시에 넣습니다. 모든 처리군에 대해 이 과정을 반복한 후, TEM 관찰 전 건조를 위해 그리드가 담긴 페트리 접시 반쪽들을 데시케이터에 넣고 하룻밤 동안 둡니다.