0 조회수 • 2:28 분 • August 31st, 2026
유전적으로 변형된 스피로헤타 박테리아 배양액을 준비합니다. 이 박테리아들은 gentamicin 내성 유전자를 보유하고 있습니다.
박테리오파지 현탁액을 박테리아 배양액에 추가합니다.
파지는 kanamycin 내성 유전자를 인코딩하는 플라스미드 DNA를 운반합니다.
혼합물을 배양합니다.
박테리오파지가 박테리아 표면에 부착되어 세포 내로 DNA를 주입합니다.
플라스미드는 독립적으로 복제되며 박테리아가 분열할 때 전달됩니다.
배양된 배양액을 gentamicin과 kanamycin 항생제가 첨가된 용해된 agarose 배지와 혼합합니다.
혼합물을 플레이트에 붓습니다. 혼합물이 굳을 때까지 기다린 후 배양합니다.
이중 항생제 선택 조건 하에서는 두 가지 내성 마커를 모두 보유한 세포만 성장하여 콜로니를 형성하며, 나머지 세포들은 사멸합니다.
콜로니를 선택하여 두 종류의 항생제가 모두 포함된 배지에 접종합니다.
추후 분석을 위해 형질전환된 플라스미드를 가진 박테리아의 성장을 촉진하도록 배양합니다.
상층액을 따라내고 펠릿을 14.5 milliliters의 신선한 BSK에 재현탁합니다. 수용체 클론 배양액에 50 microliters 이하의 PEG 침전 파지 샘플을 첨가합니다.
잘 섞어준 후, 3 °C에서 72~96시간 동안 배양합니다. 원고에 기술된 대로 PEG 침전 파지와 혼합한 후 고체 배지 도말을 통해 형질전환체를 선별합니다. 수용 클론의 배경에 따라, 선별 플레이트의 아가로스 내에 콜로니가 나타나는지 10~21일간의 배양 후 확인하십시오.
멸균된 면마개 5.75-inches 붕규산 유리 피펫을 사용하여 두 가지 항생제가 모두 포함된 플레이트에서 성장한 콜로니를 최소 5~10개 선택하고, 적절한 항생제가 포함된 1.5 milliliters BSK에 접종하십시오.