유정란 요막액으로부터의 바이러스 정제

바이러스에 감염된 유정란에서 수확한 요막액이 담긴 저장조부터 시작하십시오.

이 액체에는 바이러스 입자와 함께 숙주 유래 오염 물질이 포함되어 있습니다.

액체를 depth filter에 통과시켜 작은 오염 물질과 바이러스는 통과시키고 큰 오염 물질은 제거합니다.

그 다음, 여과된 액체를 여과 시스템에 로딩하여 막 표면을 따라 접선 방향으로 흐르게 합니다.

더 작은 오염 물질은 막을 통과하는 반면, 바이러스는 잔류하여 농축됩니다.

농축된 바이러스를 밀도 구배에 로딩하고 원심분리합니다. 바이러스는 자신의 밀도가 구배와 일치하는 지점에서 뚜렷한 밴드를 형성합니다.

바이러스가 풍부한 밴드를 투석 카세트에 수집하고 이를 완충액에 넣습니다. 반투과성 막을 통해 완충액의 물은 내부로 확산되어 들어오고, 밀도 구배 성분은 외부로 확산되어 나갑니다.

다음으로, 카세트를 고장성 용액에 넣어 수분을 제거하고 정제된 바이러스를 농축합니다.

Newcastle Disease Virus(NDV)를 정제하기 위해, 먼저 50 milliliters의 PBS를 흘려보내 이전에 설정한 실험 시스템을 프라이밍합니다.

튜브에 PBS가 약 5 mL 남았을 때 펌프를 정지하십시오. 다음으로, 1~3 µm의 정격 정지 크기를 가진 depth filter를 튜브에 연결하십시오. 필터를 통기시키기 위해 depth filter 상단의 두 번째 캡을 제거한 후, 시스템에 50 mL의 PBS를 추가로 흘려보내십시오.

PBS가 필터 상단의 환기구를 통해 흐르기 시작하면, 포트를 닫고 라인을 통해 PBS를 계속 흐르게 합니다. 그 후 폐액 용기를 새로운 멸균 수집 용기로 교체하고, depth filter를 통해 요막액을 통과시키기 시작합니다. 다음으로, 접선 유동 여과(tangential flow filtration) 또는 TFF 시스템을 개방형 구조로 설정하고 원고에 기술된 대로 실행합니다.

저장조에 액체가 약 5 mL 남았을 때, 펌프를 일시 정지하고 depth 필터링된 요막액을 저장조에 추가하십시오. 그 다음 펌프 흐름을 재개합니다. 바이러스의 전단 응력을 방지하기 위해 시스템 압력이 10 pound force per square inch를 초과하지 않도록 하는 것이 중요합니다.

용출량을 늘리려면 연동 펌프의 속도와 C-클램프를 조합하여 사용해야 합니다. 저저조에 150 내지 100 mL의 요막액이 남았을 때, 펌프를 일시 정지하고 150 내지 200 mL의 ML 버퍼를 추가하여 버