0 조회수 • 3:00 분 • August 31st, 2026
영양 성분이 풍부한 배지에 단계 희석한 파지 현탁액을 처리군으로, 파지가 없는 배지를 대조군으로 담은 멀티웰 플레이트를 준비하여 시작하십시오.
각 웰에 E. coli를 첨가합니다. 분광광도계를 사용하여 기저 광학 밀도(OD)를 측정하여 초기 세균 농도를 기록합니다.
다음으로, 박테리아의 성장과 파지의 감염이 일어날 수 있도록 플레이트를 배양합니다.
대조군에서는 박테리아가 영양분을 이용해 증식하며 OD가 증가합니다.
처리 과정에서, 파지는 세균 표면 수용체에 결합하여 자신의 게놈을 세포질로 주입합니다.
숙주 세포의 기작을 이용하여 바이러스 게놈이 복제되고 바이러스 단백질이 생성되며, 이들이 조립되어 새로운 바이러스 입자가 됩니다. 이 입자들이 세포를 용해시켜 자손 바이러스를 방출합니다.
박테리아 성장을 비교하기 위해 일정 간격으로 OD를 측정하십시오.
대조군 웰은 OD가 점진적으로 증가하는 반면, 파지 처리 웰은 더 낮은 OD 값을 나타내며, 파지 농도가 높을수록 감소 폭이 더 크게 나타납니다.
이는 최대 박테리아 성장 억제에 필요한 파지 농도를 결정하는 데 도움이 됩니다.
먼저, 교차 오염을 방지하기 위해 필터 팁을 사용하여 마이크로플레이트 분석을 준비합니다. 첫째, 96-well 마이크로플레이트의 1번부터 12번 컬럼 웰에 mTSB 180 microliters를 첨가합니다. 그런 다음, 분석 설정을 위해 멸균된 96-well 마이크로플레이트의 1번부터 8번 컬럼에 각 파지의 10배 연속 희석액을 준비합니다. 마이크로플레이트 최상단 A행의 1번부터 8번 웰에 개별 파지 또는 파지 칵테일 20 microliters를 첨가합니다.
파지 미포함 대조군 및 공백 대조군을 위해, 9번에서 12번 열의 최상단 웰에 mTSB 20 microliters를 첨가합니다. 피펫팅하는 동안, 최소 5회 이상 부드럽게 반복적으로 흡입하여 웰의 내용물을 혼합하고, 희석 단계 사이에는 팁을 교체합니다. 마지막 H행에서 20 microliters를 제거한 후, 1 milliliter 피펫을 사용하여 희석된 배양액 2~3 milliliters를 리저버로 옮겨 테스트할 세균 균주를 위한 리저버를 준비합니다.
멀티채널 피펫을 사용하여, 분주 시마다 팁을 교체하며 1번부터 10번 컬럼의 각 웰에 희석된 박테리아 배양액 20 µL를 첨가합니다. 마이크로플레이트를 덮고 37 °C에서 배양합니다. 2시간 간격으로 마이크로플레이트를 인큐베이터에서 꺼내어 마이크로플레이트 리더기를 사용하여 판독합니다.
또는, 플레이트를 마이크로플레이트 리더기에 넣고 배양하며 시간에 따라 측정하십시오.