아데노 부속 바이러스 벡터를 이용한 인간화 랫드 간의 형질전환

인간 간 세포로 재세포화된 탈세포화 쥐 간 스캐폴드가 포함된 바이오리액터 시스템으로 시작합니다.

스캐폴드는 영양분을 공급하기 위해 배지를 순환시키는 유동 시스템 내에서 유지됩니다.

재조합 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터가 포함된 버퍼를 시린지에 충전합니다.

해당 벡터는 형광 리포터와 유전자 억제 RNA를 인코딩하는 트랜스진 카세트가 포함된 자가 보완적 DNA를 운반합니다.

배지 흐름을 중단하고 유입 튜브를 분리하십시오.

스캐폴드에 혈액을 공급하는 주 혈관을 통해 벡터를 주입하십시오.

벡터와 세포의 상호작용이 일어날 수 있도록 배양합니다.

벡터는 수용체 매개 세포내섭취(receptor-mediated endocytosis)를 통해 간 세포로 진입합니다.

내부로 진입한 벡터는 엔도솜을 탈출하여 자가 상보적 DNA를 핵 내부로 방출합니다.

자기 상보적 DNA는 형광 단백질과 유전자 억제 RNA를 생성하여 외래 유전자의 직접적인 발현을 가능하게 합니다.

배지 흐름을 점진적으로 재개하여 스캐폴드 내의 순환을 복구합니다.

이제 형질도입된 간 모델을 후속 분석에 사용할 수 있습니다.

이제 간 모델을 형질전환합니다. 먼저, 5 ml의 PBS에 27 trillion vector가 포함된 용액을 주사기에 준비합니다. 페놀 레드(phenol red)를 5 µg/ml 농도로 추가할 수 있습니다.

그 다음 간을 배지 회로에서 분리하고 벡터를 시스템에 주입합니다. 주입 후, 펌프 작동 없이 시스템을 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 앞서 설명한 대로 유량을 점진적으로 증가시킵니다.

이후, 형질도입된 간을 6일 동안 배양하면서 격일로 배지 50 milliliters를 교체합니다.