형질전환된 포유류 세포로부터 아데노 부속 바이러스(Adeno-Associated Virus) 수확하기

아데노 부속 바이러스(adeno-associated virus) 벡터를 생성하는 형질전환된 포유류 세포가 들어 있는 다층 세포 챔버로 시작합니다. 세포 챔버는 고수율의 바이러스 수확을 가능하게 합니다.

챔버를 세게 흔들어 부착된 세포를 떼어내어, 바이러스가 포함된 세포와 세포 외 바이러스 입자가 배지로 방출되게 합니다.

내용물을 튜브로 옮기고 원심분리하여 바이러스가 포함된 세포를 펠릿화합니다.

세포 외 바이러스가 포함된 상층액을 수집하여 보관 병으로 옮깁니다.

펠렛을 용해 버퍼(lysis buffer)에 재현탁하고 배양합니다.

완충액 내의 효소와 세제가 세포를 용해하여 세포 내에 온전하게 보존된 바이러스를 용액 속으로 방출시킵니다.

용해물을 원심분리하여 세포 파편을 펠렛화합니다. 바이러스가 포함된 상층액을 수집하여 세포 외 바이러스가 들어 있는 동일한 보관 병에 추가합니다.

추가 정제 전까지 조 viral 현탁액을 저온에서 보관하십시오.

배양 후, 배지가 탁해 보일 때까지 세포 배양 챔버를 세게 흔들어 세포를 탈착시킨 다음, 이를 500 mL 원심분리 튜브 4개에 붓습니다.

4 °C에서 18,000 x g로 30분 동안 원심분리하여 세포를 펠렛화합니다. 맑은 상층액을 1 L PETG 병에 붓고, 500 mL 원심분리 튜브에 담긴 세포 펠렛을 50 mL의 용해 완충액(lysis buffer)으로 재부유시킵니다. 해당 튜브를 37 °C에서 60분 동안 배양합니다.

배양 후, 튜브를 18,000 x g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 동일한 1 L PETG 병으로 옮깁니다. -80 °C에서 보관하십시오.