치료용 바이러스 생산 상피세포의 생산 및 수확

혈청 함유 배지에서 배양된 신장 상피 세포로 시작하십시오.

이 배지를 치료 목적으로 면역 조절 유전자를 운반하도록 유전적으로 설계된 바이러스가 포함된 무혈청 배지로 교체하십시오.

바이러스가 세포 표면 수용체에 부착될 수 있도록 세포를 배양합니다.

부착되지 않고 남아 있는 바이러스가 포함된 상층액을 제거합니다.

세포 생존을 위해 신선한 혈청 함유 배지를 추가하고 배양합니다.

배양 과정 동안, 바이러스는 수용체 매개 세포내섭취를 통해 침투하여 게놈을 방출하며, 이 게놈이 바이러스 RNA를 생성합니다.

바이러스 게놈이 복제되는 동안, 바이러스 RNA는 새로운 바이러스 단백질을 생성합니다.

바이러스 단백질들이 새로운 바이러스 입자로 조립되어 주변 배지로 방출됩니다.

이러한 자손 바이러스들은 인접한 세포로 침투하여 감염을 일으키고, 감염된 세포들의 클러스터를 형성합니다.

치료용 바이러스 자손을 생성하는 세포를 수확하기 위해 세포 단층을 부드럽게 긁어냅니다.

현탁액을 튜브에 수집하고 추후 분석을 위해 저온에서 보관하십시오.

홍역 바이러스 복제 역학을 분석하려면, 감염 전날 12-well 플레이트의 웰당 1 mL의 10% FBS 함유 DMEM에 100,000개의 Vero 세포를 분주하며, 분석하고자 하는 각 시점당 최소 2개의 웰을 준비합니다. 세포를 감염시키기 위해 기존 배지를 각각 정해진 양의 바이러스가 포함된 300 µL의 무혈청 배지로 교체합니다. 이후 37 °C, 5% CO2 조건에서 최소 2시간 동안 배양합니다.

접종액을 제거하고 10% FBS가 포함된 DMEM 1 mL를 첨가한 후 배양을 계속합니다. 감염 후 적절한 시점에 세포를 배지로 직접 긁어내어 바이러스 자손을 수확합니다. 각 웰의 내용물을 개별 튜브로 옮깁니다.

액체 질소로 급속 냉동하여 역가 측정 전까지 -80 °C에서 보관한 후, 원고에 기술된 대로 진행하십시오.