바이러스 인코딩 이중특이성 T세포 각성제(Bispecific T-Cell Engager)의 면역 조절 활성 평가

표적 항원을 발현하는 유전자 변형 종양 세포를 포함하는 테스트 웰과, 해당 항원이 없는 종양 세포를 포함하는 대조군 웰로 시작합니다.

바이러스 트랜스진에 의해 인코딩된 이중 특이성 T세포 연결체(BTE)를 사용하며, 이는 타겟 항원과 T세포 특이적 수용체에 각각 결합하는 두 개의 결합 부위를 가집니다.

BTE와 T 세포를 웰에 넣고 배양합니다.

시험 시료에서 BTE는 종양 세포와 T 세포를 교차 결합시켜, T 세포가 세포 독성 과립을 방출하도록 활성화합니다.

이렇게 하면 종양 세포가 용해되어 세포 내 효소가 방출됩니다.

대조군에서 BTE는 T 세포에만 결합하여 종양 세포의 용해를 방지합니다.

원심분리하여 상청액을 수집한다.

기질 용액을 첨가하고 배양합니다.

효소는 기질을 붉은색 제품으로 촉매합니다.

정지 용액을 첨가하고 색의 강도를 측정합니다.

테스트 샘플에서 더 높은 강도가 확인되면 BTE의 표적 특이적 면역 조절 활성이 입증되는 것입니다.

LDH 방출을 통해 BTE 유도 세포 매개 세포독성을 평가하려면, 먼저 원고에 설명된 대로 바이러스 감염 표적 세포에서 발현되어 분비된 트랜스진 산물을 분리하고 면역 이펙터 세포를 분리하십시오. 그런 다음 U-bottom 96-well 플레이트에 표적 세포를 분주하고 원고에 설명된 대로 샘플을 포함시키십시오. 미리 분리해 둔 면역조절제를 원하는 농도로 각각의 샘플에 첨가하십시오. 원하는 비율로 면역 이펙터 세포를 첨가하고, 웰당 총 부피가 100 µL가 되도록 배지를 추가하십시오. 37 °C 및 5% CO2 환경에서 미리 결정된 원하는 시간 동안 배양하십시오.

세포를 250 ×g에서 4분 동안 원심 분리합니다. 세포가 옮겨지지 않도록 주의하며, 각 웰의 상층액 50 µL를 평底 96-well 플레이트의 웰로 옮깁니다.

제조사의 지침에 따라 기질 용액을 준비한 후, 각 웰에 50 µL씩 첨가하십시오. 실온의 암소에서 30분 동안 또는 Tmax 샘플이 진한 붉은색으로 변할 때까지 배양하십시오. 배양 후, 각 웰에 50 µL의 정지 용액을 첨가하십시오.

4,000 x g에서 1분간 원심분리한 후, 중공침을 사용하여 기포를 제거합니다. 490 nm에서 광학 흡광도를 측정하고 원고에 기술된 대로 계산합니다.