숙주 면역 반응 평가를 위한 마우스의 비강 내 마우스 헤르페스바이러스 감염

호흡기 투여를 위해 배치된 마취된 건강한 마우스로 시작합니다.

감염을 유도하기 위해 마우스 헤르페스 바이러스를 비강 내로 투여합니다.

바이러스는 기도를 통해 이동하여 폐에 도달합니다.

폐 내부에서 바이러스는 폐 상피 세포를 감염시키고 뉴클레오캡시드를 방출합니다.

바이러스 게놈이 핵으로 들어가 바이러스 RNA로 전사됩니다.

숙주 세포질 센서가 바이러스 RNA를 인식하고 특정 전사 인자를 활성화하는 신호 전달 경로를 개시합니다. 이후 이러한 인자들이 사이토카인 유전자의 발현을 촉진하여 항바이러스 사이토카인 생성을 유도합니다.

감염 후, 안락사시킨 마우스를 해부하여 폐 조직을 채취합니다.

폐엽 하나를 실리카 비드가 들어 있는 튜브에 넣고 차가운 배양액을 추가합니다.

항바이러스 사이토카인을 포함한 세포 내 성분을 방출시키기 위해 조직을 균질화하여 세포를 파쇄합니다.

균질액을 얼음 위에 놓아 냉각시킨 후, 조직이 완전히 파쇄되었는지 확인하기 위해 균질화 과정을 반복하십시오.

원심분리하여 세포 파편을 침전시킵니다.

헤르페스 바이러스 감염에 대한 숙주 면역 반응을 평가하기 위해 항바이러스 사이토카인이 포함된 상층액을 수집합니다.

마취된 C57-black-six 마우스에 천연 마우스 병원체인 gamma herpes virus 68 40 plaque forming units를 40 microliters 분량으로 비강 내 접종합니다. 감염 후 실험 시점에 마우스를 희생시킨 후, 흉골을 따라 왼쪽 측면을 절개하여 흉부를 열고, 날카로운 가위로 갈비뼈를 절단하여 폐 조직을 수집합니다.

좌엽을 1.0 mm Zirconia silica beads 500 µl가 들어 있는 멸균된 1.5 ml 스크류 캡 튜브에 넣습니다. 차가운 무혈청 DMEM 1 ml를 첨가하고 30초 동안 비드 비팅(bead beating)하여 폐 조직을 균질화합니다.

튜브를 얼음 위에서 2분 동안 냉각시킨 후, 비드 비팅 과정을 한 번 더 반복합니다. 그런 다음 4 °C에서 튜브를 원심분리하고 상층액을 수집합니다. 이제 제조사의 지침에 따라 시판되는 사이토카인 ELISA 키트를 사용하여 원하는 사이토카인을 측정합니다.