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미생물학
0 조회수 • 2:37 분 • September 30th, 2026
단일 가닥 RNA 바이러스인 지카 바이러스에 감염된 상피 세포가 담긴 멀티웰 플레이트를 준비합니다.
감염 과정 동안, 바이러스는 이중 가닥 RNA 또는 dsRNA 중간체를 형성하는 RNA를 방출합니다.
이러한 dsRNA 중간체를 검출하기 위해, 배지를 메탄올로 교체하여 세포를 투과성 있게 만들고 세포의 완전성을 보존합니다.
메탄올을 제거하고 버퍼로 세척합니다.
비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 블로킹 용액을 추가합니다.
바이러스 dsRNA에 특이적인 1차 항체를 첨가합니다.
1차 항체가 바이러스 dsRNA에 결합할 수 있도록 저온에서 가볍게 흔들어주며 배양합니다.
버퍼로 헹군 후, 적색 형광체 결합 2차 항체를 첨가하고 배양합니다.
2차 항체가 1차 항체에 결합합니다.
버퍼로 세척한 후, 핵을 염색하기 위해 형광 DNA 결합 염색약을 첨가합니다.
형광 현미경으로 관찰하여 감염된 세포 내에 표지된 바이러스 dsRNA 중간체를 시각화합니다.
면역세포화학염색을 위해, 12-well plate의 well에서 배지를 제거하고 각 well에 메탄올 1 ml를 첨가합니다. 4 °C에서 30분 동안 세포를 고정시킵니다. 그 다음, 고정된 세포를 1x PBS로 3회 세척합니다. 이어서 블로킹 버퍼를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 배양합니다. 마우스 단클론 anti-double-stranded RNA 항체 J2를 블로킹 버퍼로 1:100으로 희석하여 세포에 첨가하고, 이 용액에서 4 °C로 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, goat anti-mouse IgG-594 2차 항체를 블로킹 버퍼로 1:1,000으로 희석하고, 1x PBS로 세포를 세척한 후 항체를 첨가하여 상온에서 1시간 동안 배양합니다. 1x PBS로 세포를 세척한 후, Hoechst 염색약으로 핵을 염색하고 형광 현미경을 사용하여 100x 배율로 세포를 관찰합니다.
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