바이러스 입자의 농축 및 정제

숙주 세포 잔해와 혼합된 바이러스 입자 현탁액을 준비합니다.

큰 파편들을 침전시키기 위해 원심분리합니다. 작은 파편들과 함께 바이러스 입자가 포함된 상층액을 수집합니다.

상등액을 여과하여 남아 있는 작은 잔해물을 제거합니다.

여과액에 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 포함된 염 용액을 첨가하십시오. 튜브를 반전시켜 혼합한 후 배양하십시오.

PEG는 바이러스 입자들을 서로 더 가깝게 밀어내어 침전을 촉진하는 분자 밀집제(molecular crowding agent) 역할을 합니다.

동시에, 염은 바이러스 입자 사이의 정전기적 반발력을 중화시켜 이들이 응집될 수 있도록 함으로써 이러한 효과를 강화합니다.

튜브를 원심분리하여 바이러스 응집체를 펠렛으로 만듭니다. PEG가 풍부한 상층액은 제거합니다.

원심분리를 반복하고, 남아 있는 모든 상층액을 제거합니다.

완충액을 첨가하고 교반하며 배양하여 펠릿을 재부유시킵니다.

바이러스 입자가 포함된 현탁액을 분주하고, 바이러스의 구조적 무결성과 감염력을 유지하기 위해 초저온에서 보관하십시오.

바이러스 상층액을 2000 ×g에서 10분 동안 원심분리합니다. 그 후 0.45 µm 저단백 결합 시린지 필터로 여과하여 바이러스 배지를 정제합니다. 다음으로, 배지에 5X polyethylene glycol 6000 용액을 첨가합니다. 튜브를 여러 번 뒤집어 혼합합니다. 그런 다음 바이러스 혼합물을 4 °C에서 최소 12시간 동안 배양합니다.

9일차에 바이러스 혼합물을 2,500 ×g에서 45분 동안 원심분리합니다. 45분 후, 상층액을 제거하고 다시 2분 동안 원심분리합니다. 이어서 상층액을 다시 한 번 제거합니다. 그 후, 멸균된 PBS 320 µL를 첨가하여 펠릿을 재부유시키고, 실온의 쉐이커에서 30분 동안 배양합니다. 다음 날, 바이러스를 소분하여 -80 °C에서 냉동 보관합니다.