탈세포화된 쥐 신장의 준비: 적출된 쥐 신장에서 무세포 혈관화된 전체 장기 골격을 생성하는 절차

탈세포화된 전체 장기 스캐폴드는 온전한 혈관 네트워크를 가진 3차원 세포외 기질로 구성됩니다. 이러한 스캐폴드는 특정 조직 구성과 기능적 무결성을 유지하며 장기 생명공학에서 필수적인 역할을 합니다.

탈세포화된 쥐 신장을 준비하려면 먼저 주요 동맥 및 정맥 맥관 구조인 복부 대동맥 및 하대정맥과 함께 갓 채취한 쥐 신장을 얻습니다. 요관, 소동맥 및 정맥 분기점을 묶어 후속 관류 과정에서 액체 누출을 방지합니다.

장기 수분 공급을 보장하기 위해 신장을 적절한 완충액에 넣으십시오. 적절한 크기의 카테터를 주요 맥관 구조에 삽입하고 고정합니다. 카테터를 연동 펌프에 연결합니다. 항응고제 함유 완충액으로 원하는 기간 동안 적절한 유속과 압력으로 신장을 관류합니다.

이 단계는 정맥 유출을 통해 장기에서 혈액을 효율적으로 제거하는 데 도움이 됩니다. 세포막을 투과화하기 위해 관류액을 비이온성 계면활성제로 변경합니다. 그 후, 음이온성 계면활성제로 장기를 관류하여 세포막과 핵막을 효과적으로 가용화하여 세포 용해와 세포내 내용물의 방출을 초

해방된 세포 성분과 파편이 신장 밖으로 흘러나와 점차 반투명하게 만듭니다. 탈세포화된 신장에 항생제와 항응고제가 포함된 적절한 완충액을 주입하여 장기에서 잔류 계면활성제와 남아 있는 파편을 제거합니다. 항생제는 탈세포화된 기관 내에서 박테리아 성장 가능성을 방지합니다.

복부 대동맥과 하대정맥이 있는 왼쪽 신장을 채취합니다. 요관, 흉부 대동맥, 상대정맥 및 복부 대동맥의 가지를 결찰합니다. 10cm 페트리 접시의 DPBS에서 장기를 수분으로 유지합니다. 23게이지 카테터로 복부 대동맥과 하대정맥을 캐뉼라합니다.

잔여 혈액을 제거하려면 캐뉼라를 연동 펌프에 연결하고 500rpm 및 섭씨 37도에서 90분 동안 DPBS 5ml와 헤파린당 16단위로 장기를 세척합니다. 신장을 탈세포화하려면 1% Triton X-100으로 3시간 동안 관류한 다음 0.75% SDS 용액으로 40밀리리터 수은의 일정한 압력에서 6시간 동안 관류합니다.

잔류 SDS를 제거하려면 증류수에 1% 페니실린을 18시간 동안 관류한 다음 멸균 DPBS와 헤파린 밀리리터당 16단위를 90분 동안 관류합니다.