세균성 각막염의 Porcine Ex vivo 각막 모델: 각막 상피 세포에서 세균 감염을 확립하는 기술

척추동물의 눈에서 가장 바깥쪽 보호 덮개인 각막이 녹농균에 감염되어 각막 염증 상태인 각막염이 발생합니다.

생체 외 각막 각막염 모델을 확립하려면 돼지 눈 각막 공막 단추를 페트리 접시에 넣습니다. 이 조직 부분은 공막의 잔해로 둘러싸인 각막(섬유성 눈 덮개)으로 구성됩니다. 페트리 접시에 항생제 함유 배지를 보충하여 각막 상피 표면에서 오염된 미생물을 제거합니다.

각막의 중앙 부분을 찾습니다. 가장 바깥쪽 각막 상피층을 관통하는 원하는 패턴으로 표면 수평 및 수직 절개를 합니다. 절개된 조직을 각막면이 아래로 향하도록 특수 속이 빈 틀에 옮깁니다.

각막강을 액화 한천으로 채우고 굳히도록 하여 금형 내부의 조직을 억제합니다. 금형을 뒤집어 각막 상피의 상처 표면을 노출시킵니다. Pseudomonas 현탁액을 각막의 절개 부위에 피펫팅합니다. 최적의 박테리아 성장을 위해 더 많은 성장 배지로 금형을 오버레이하십시오. 배양 접시에 배지를 보충하고 배양합니다.

박테리아는 상피 절개 부위를 가로질러 간질을 침범합니다. 간질 내부에서 박테리아는 각막의 면역 세포, 단백질 및 체액의 침윤을 일으켜 염증 반응을 일으킵니다. 체액 축적은 각막 혼탁을 증가시켜 세균성 각막염을 확인합니다.

페트리 접시에서 배지를 제거하고 멸균 PBS 1밀리리터로 각막을 두 번 헹굽니다. 집게로 각막을 잡고 부드럽게 짜냅니다. 10A 메스를 사용하여 각막공막 단추의 중앙 부분에서 상피층을 통해 기본 간질까지 4개의 절단(수직 2개, 수평 2개)을 만듭니다.

멸균 유리 몰드를 넓은 부분이 위로 향하도록 6웰 플레이트에 놓습니다. 그런 다음 각막을 유리 몰드 중앙에 놓고 상피 면이 아래를 향하도록 각막의 상처 부위를 유리 몰드 중앙에 놓습니다.

한천 용액 1밀리리터를 추가하여 유리 몰드를 완전히 채웁니다. 한천이 굳도록 한 후 각막 상피가 위쪽을 향하도록 유리 몰드를 뒤집습니다.

유리 몰드는 접종물이나 약물 용액의 누출을 방지하기 위해 한천으로 가장자리까지 밀봉

해야 합니다.

200마이크로리터의 박테리아 배양액을 절단 부위에 직접 피펫팅합니다. 또한 각 실험에 대해 박테리아 배양을 추가하는 대신 하나의 각막에 200마이크로리터의 멸균 PBS를 추가하여 대조군을 설정합니다.

다음으로, 각 각막 상단에 185마이크로리터의 PBS를 추가하여 상피를 촉촉하게 유지합니다. 그런 다음 항생제 없이 DMEM 1밀리리터를 각 웰 바닥에 추가합니다. 6웰 플레이트를