In Vitro Culture and Differentiation of Primary Monocytes into Macrophages

단핵구는 감염으로부터 보호하기 위해 대식세포와 항원 제시 수지상 세포로 분화하는 면역 세포입니다.

단핵구를 배양하고 시험관 내에서 분화를 유도하려면 적절한 배양 배지에 1차 인간 단핵구의 현탁액을 취하는 것부터 시작하십시오. 세포 현탁액을 배양 플레이트의 웰에 첨가합니다. 세포가 부착될 수 있도록 생리학적 조건에서 배양합니다.

분화 유도 사이토카인(과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 또는 GM-CSF)을 한 웰에 추가하고 대식세포 콜로니 자극 인자 또는 M-CSF를 다른 웰에 추가합니다. 적절한 기간 동안 배양하십시오.

GM-CSF는 세포의 이종이량체 수용체에 결합하여 단핵구의 분화를 유도합니다. GM-CSF 결합은 세포내 신호 전달 경로의 활성화를 초래하여 M1 대식세포 유사 표현형으로 프라이밍하기 위한 유전자의 발현을 유도합니다.

세포질 부피가 큰 둥근 세포인 M1 유사 세포는 전염증 작용을 하며 감염에 대한 방어를 돕습니다.

다른 우물에서 M-CSF는 단핵구의 동종이량체 수용체에 결합하여 세포의 분화를 유도합니다. M-CSF 결합은 GM-CSF와 다른 세포내 신호 전달 경로의 활성화를 초래하여 M2 대식세포 유사 표현형으로 프라이밍하기 위한 유전자의 발현을 유도합니다.

길쭉한 모양의 M2 유사 세포는 항염증 효과가 있으며 조직 리모델링 및 복구 기능을 나타냅니다.

분화된 대식세포 세포는 추가 다운스트림 분석을 위한 준비가 되어 있습니다.

계수 후, 분리된 단핵구를 항생제가 보충된 섭씨 37도 무혈청 RPMI 1640 배지의 밀리리터당 10 내지 6번째 세포에 1배 재현탁하고, 1밀리리터의 재현탁 세포를 생물안전 캐비닛의 35밀리미터 플레이트에 플레이트합니다. 그런 다음 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 30-60분 동안 넣어 세포가 웰 바닥에 부착되도록 합니다.

M1 유사 표현형을 가진 대식세포에 대해 프라이밍하려면 GM-CSF 밀리리터당 25나노그램을 함유한 소태아 혈청 100마이크로리터를 각 플레이트에 추가합니다. M2 유사 표현형을 가진 대식세포에 대해 프라이밍하려면 M-CSF 밀리리터당 50나노그램을 포함하는 100마이크로리터의 태아 소를 각 플레이트에 추가합니다.