Isolation of Lymphocytes from a Mouse Peyer's Patch

소장벽에 조직화된 림프 조직의 응집체인 파이어 패치인 PP에는 B 림프구, T 림프구, 수지상 세포 및 대식세포를 포함한 면역 세포가 포함되어 있습니다.

마우스 PP에서 림프구를 분리하려면 안락사된 마우스로 시작하십시오. 복벽을 절개하여 복막강을 노출시킵니다. 맹장을 찾으십시오. 회맹부 접합부를 해부하여 맹장을 소장에서 분리합니다.

장간막을 절제하고 십이지장에서 소장을 절개하여 복막강에서 소장을 제거합니다. 소장을 식힌 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트에 넣고 헹구어 잔해물을 제거합니다.

장간막이 아래를 향하도록 소장을 배치하고 조직 수분을 유지하기 위해 배지로 적십니다. PP(장벽의 항장간막 쪽에 있는 흰색 다소엽 응집체)를 식별합니다.

주변 장 조직을 제외하고 PP를 조심스럽게 절제합니다. 배지가 들어 있는 튜브로 옮깁니다. 지속적인 교반 하에 배양합니다. 이 교반 단계는 PP에서 점액, 세포 파편 및 대변을 분리하여 PP 림프구의 회복을 향상시킵니다.

다음으로, 조직을 적절한 메쉬 크기의 세포 여과기로 옮깁니다. PP를 부드럽게 파괴하고 세포를 방출합니다. 단일 세포 림프구 현탁액을 얻기 위해 스트레이너를 통해 배지로 플러시합니다. 세포 안정성을 유지하기 위해 현탁액을 저온에서 원심분리합니다.

림프구를 배지에 재현탁하고 추가 분석에 사용합니다.

마우스를 바로 누운 자세로 놓고 70% 에탄올로 복부를 멸균하는 것으로 시작합니다. 치골에서 흉곽까지 피부와 복막을 통해 정중선 복부 절개를 하여 복강을 열고 맹장과 회맹 접합부를 찾습니다.

소

장과 맹장을 분리하기 위해 접합부에서 가능한 한 원위부로 절단하고 장간막을 가위로 잘라 유문 괄약근까지 소장 전체를 조심스럽게 제거합니다.

유문과 십이지장 사이의 접합부를 잘라내어 복강에서 소장을 완전히 분리하고 분리된 소장을 차가운 RPMI 배지가 들어 있는 6웰 플레이트의 한 웰에 넣고 10% 태아 소 혈청 또는 얼음 위의 FBS를 보충합니다. 그런 다음 모든 세그먼트가 차가운 매체에 잠길 때까지 조직을 수동으로 부드럽게 교반합니다.

모든 장을 채취하면 집게를 사용하여 장 한쪽 가장자리의 장간막 지방을 잡고 샘플을 장간막면이 아래로 향하게 하여 종이 타월 위에 놓습니다. 조직 탈수 및 끈적임을 방지하기 위해 RPMI와 10% FBS로 전체 장 분절을 적시고 장벽의 항장간막 쪽에 콜리플라워 모양의 흰색 다소엽 응집체로 나타나는 파이어 패치를 찾습니다.

파이어 패치를 채취하려