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면역학
0 조회수 • 2:45 분 • July 8th, 2025
말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 림프구, 단핵구 및 수지상 세포를 포함한 특수 면역 세포의 이질적인 집단으로 구성됩니다.
PBMC를 분리하려면 새로 얻은 인간 버피 코트 혈액이 들어 있는 튜브로 시작합니다. 버피 코트 혈액에는 혈장에 부유하는 다엽 핵, 적혈구 및 혈소판이 있는 과립구와 함께 PBMC가 포함되어 있습니다.
PBMC 분리에 가장 적합한 원하는 비밀도를 가진 동일한 부피의 밀도 구배 매체 위에 버피 코트 현탁액을 조심스럽게 오버레이합니다.
원심분리 중에 서로 다른 세포 유형은 구배 배지에 대한 세포 밀도에 따라 별개의 층으로 분리됩니다. 또한, 밀도 구배 배지의 다당류는 적혈구 응집 및 침강을 촉진합니다.
밀도가 높은 적혈구와 과립구는 튜브 바닥으로 침전되는 반면, 밀도가 가장 낮은 혈장은 최상층을 형성합니다. 밀도 구배 매질보다 밀도가 낮은 PBMC는 플라즈마-밀도 구배 매체 계면에서 흐린 흰색 층을 형성합니다.
상단 플라즈마 층을 제거합니다. PBMC가 포함된 탁한 층을 조심스럽게 수집하고 무혈청 배지가 있는 신선한 튜브로 옮깁니다. 원심분리하여 PBMC를 펠릿화합니다. 혈소판과 잔류 구배 배지를 포함하는 상청액을 버립니다.
PBMC를 신선한 배지에 재현탁하고 추가 분석에 사용합니다.
인간 기증자 버피 코트에서 PBMC를 분리하려면 피펫을 사용하여 15밀리미터의 버피 코트 혈액을 50밀리리터 튜브의 측면 아래로 15밀리리터의 밀도 구배 배지 위에 천천히 오버레이하고 원심분리하여 세포를 분리합니다. 멸균 파스퇴르 피펫을 사용하여 상단 혈장층을 제거하고 단핵 세포층을 새 50밀리리터 튜브로 조심스럽게 옮깁니다.
무혈청 RPMI 배지를 세포에 최종 부피 50밀리리터까지 추가하고 원심분리하기 전에 튜브를 부드럽게 몇 번 뒤집습니다. 그런 다음 계수를 위해 20밀리리터의 무혈청 배지에 세포를 재현탁합니다.
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