0 조회수 • 3:47 분 • July 8th, 2025
면역 반응을 유도하기 위해 수지상 세포(DC)는 MHC 클래스-II와 공동 자극 분자 CD80 및 CD86으로 표시되는 항원을 제시합니다. 면역 반응 특성에 따라 미성숙, 성숙 및 내약성 DC로 세분화됩니다.
시험관 내에서 다양한 수지상 세포 하위 집합을 생성하려면 인간 단핵구(성장 인자와 신호 분자인 사이토카인 IL-4를 포함하는 완전한 배지의 면역 전구체 세포)를 포함하는 멀티웰 플레이트로 시작합니다.
세포를 장기간 배양합니다. 성장 인자와 IL-4는 단핵구 증식과 미성숙 DC로의 분화를 유도합니다.
미성숙 DC는 패턴 인식 수용체인 PRR을 가지고 있으며 낮은 MHC 클래스 II 및 공동 자극 분자를 발현하여 면역 반응을 유도하는 능력이 감소합니다.
미성숙 DC가 포함된 웰 1개를 면역 조절제인 비타민 D3 및 글루코코르티코이드로 치료합니다. 이러한 면역조절제는 MHC 클래스 II 및 공동 자극 분자의 발현을 하향 조절합니다. 이는 과장되거나 바람직하지 않은 면역 반응을 방지하는 면역 조절 세포인 관용성 DC로 분화됩니다.
미성숙 DC가 포함된 다른 웰을 지질다당류인 LPS(항원)로 처리합니다. LPS는 세포의 톨 유사 수용체-4(PRR)와 상호 작용하여 신호 전달 캐스케이드를 시작하고 이를 성숙한 세포로 분화시킵니다. 이 세포는 항원 처리 및 제시에 효율적인 높은 MHC 클래스 II, 공동 자극 분자 및 PRR을 발현합니다.
수지상 세포 아형을 나타내는 뚜렷한 형태학적 특성에 대해 차등적으로 처리된 우물을 관찰하십시오.
6웰 플레이트에 IL-4의 세포 배양 배지 밀리리터당 0.3 내지 0.5 x 106의 농도로 CD14+ 단핵구 4세트를 시드한다. 세포를 섭씨 37도의 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 배양합니다. 4일째에 배양액에서 850마이크로리터의 배지를 제거하고 원심분리합니다.
상청액을 흡인하고 펠릿을 1밀리리터의 세포 배양 배지에 재현탁합니다. 세포 혼합물을 배양액에 다시 첨가합니다. 5일째에 배지 밀리리터당 비타민 D3 스톡 1마이크로리터와 덱사메타손 스톡 1마이크로리터를 세트 중 2개에 첨가하여 내약성 moDC를 생성합니다.
6일째에 GM-CSF 밀리리터당 200나노그램과 IL-4 밀리리터당 200나노그램을 모든 세트에 추가합니다. 성숙한 moDC를 생성하기 위해 GM-CSF 및 IL-4로만 처리된 세트 중 하나에 LPS 밀리리터당 1마이크로그램을 추가합니다.
LPS 내약 모드 moDC 한 세트에 LPS 밀리리터당 1마이크로그램을 추가하여 LPS-내약 모드 moDC를 생성합니다. 마지막으로, 7일째에 배양 접시를 PBS-EDTA로 세척하여 다양한 유형의 moDC를 수확합니다.