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면역학
0 조회수 • 4:00 분 • July 8th, 2025
수 간질 세포(골격 조직 계통의 전구 세포)인 BMSC는 조혈 줄기 세포, 조혈모세포 및 분화된 혈액 세포를 포함한 이질적인 세포 집단과 함께 골수 강 내에 존재합니다.
BMSC를 분리하려면 갓 수확한 마우스 경골부터 시작하십시오. 뼈의 근위부 및 원위 끝을 절단하여 골수강을 노출시킵니다. 절단된 뼈를 배지가 들어 있는 적응된 미세분리기 튜브에 넣습니다.
고속으로 원심분리하여 뼈에서 골수를 씻어내고 튜브 바닥에 골수 펠릿을 형성합니다. 튜브에서 뼈를 제거합니다. 주사기에 부착된 바늘을 사용하여 골수를 분쇄하여 덩어리를 부수십시오.
현탁액에 배지를 첨가하십시오. 적절한 메쉬 크기의 세포 여과기를 통해 여과하여 뼈 조각을 제거합니다. 골수 세포가 포함된 여과액을 플라스틱 배양 플레이트에 도금합니다.
적절한 기간 동안 배양하는 동안 BMSC는 플라스틱 배양 플레이트의 바닥에 부착되어 증식하는 반면, 조혈모세포를 포함한 비부착 세포는 현탁액으로 남아 있습니다.
비부착 세포가 포함된 배지를 폐기하십시오. 트립신을 사용하여 플레이트에서 BMSC를 분리합니다. 트립신을 비활성화하기 위해 혈청을 함유한 배지를 첨가하십시오. 원심분리하여 상청액을 버립니다.
BMSC를 신선한 배지에 재현탁하고 배양 플레이트에 세포를 파종합니다. 배양하여 BMSC가 플레이트에 부착되어 단층을 형성할 수 있도록 합니다.
모든 뼈가 수집되면 샘플을 얼음 위의 PBS에 넣고 샘플을 멸균 배양 후드로 옮깁니다. 멸균 기술을 사용하여 각 뼈의 근위 및 원위 끝 모두에서 1-2mm 절단을 한 후 미세 원심분리기 튜브의 각 수정된 마이크로피펫 팁에 3개의 뼈를 넣습니다.
원심분리를 통해 뼈에서 골수를 채취하여 골수가 회전이 끝날 때 각 미세 원심분리기 튜브의 바닥에 완전히 펠릿화되었는지 확인합니다. 골수를 모두 채취하면 뼈가 흰색으로 나타납니다. 적절한 생물학적 안전 폐기를 위해 수집 튜브에서 마이크로피펫 팁과 뼈를 제거합니다.
골수 세포를 도금하려면 먼저 25게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기를 사용하여 펠릿을 천천히 재현탁하고 덩어리를 부수고 샘플을 단일 15밀리리터 원추형 튜브에 모습니다. 샘플 500마이크로리터당 골수 줄기 세포 배양 배지 10밀리리터를 첨가하고 70미크론 필터를 통해 세포 현탁액을 50밀리리터 원추형 튜브에 여과하여 뼈 조각을 제거합니다.
분할된 골수 세포 집단 배양을 도금하려면 한 마리의 마우스로부터 수확한 골수 세포를 10c
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