인간 말초 혈액 단핵 세포에서 활성화된 T 세포의 배양

0 조회수3:25 • July 8th, 2025

나이브 T 세포와 항원 제시 세포, APC 사이의 다중 세포-표면 수용체-리간드 상호작용은 T 세포 활성화 및 증식을 유도합니다.

이 과정에서 두 가지 주요 사건은 CD3-T 세포 수용체 복합체에 의한 APC 발현 항원의 인식과 APC 발현 B7 리간드와 T 세포 수용체 CD28 사이의 상호 작용을 포함합니다.

시험관 내에서 T 세포 활성화 및 증식을 연구하려면 적절한 배양 배지에 현탁된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 섭취하십시오. 항-CD3 및 항-CD28 항체로 코팅된 마그네틱 비드를 추가하고 세포를 두 개의 원추형 튜브로 나눕니다.

사이토카인 인터루킨-2, IL-2를 첫 번째 튜브에 추가하고 인터루킨-15, IL-15를 다른 튜브에 추가합니다. 세포를 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 인큐베이트.

비드의 항-CD3 및 항-CD28 항체는 각각 T 세포에서 발현되는 CD3-T 세포 수용체 복합체 및 CD28 수용체에 결합하여 T 세포 활성화 및 증식을 유발합니다.

IL-2를 사용하면 사이토카인이 활성화된 T 세포 표면의 수용체에 결합하여 이펙터 T 세포로 분화 및 증식됩니다. 반대로, IL-15는 주로 T 세포의 분화 및 기억 T 세포로의 증식을 유도합니다.

세포의 절반을 재현탁하고 새로운 웰로 옮겨 세포 성장을 허용합니다. 후속 분석을 위해 사이토카인으로 분화된 T 세포 집단을 유지하기 위해 IL-2 또는 IL-15를 포함하는 신선한 배지를 추가합니다.

시작하려면 백만 세포당 12.5마이크로리터의 비드를 미세 원심분리기 튜브로 옮기고 튜브에 있는 비드 12.5마이크로리터당 12.5마이크로리터의 PBS를 추가하여 CD3/CD28 비드를 세척합니다. 그런 다음 미세 원심분리기 튜브를 적절한 자석 위에 1분 동안 놓고 완충액을 버리고 T-세포 배지의 원래 부피에 비드를 재현탁합니다.

다음으로, 1:2 비드 대 세포 비율로 100만 세포당 12.5마이크로리터의 비드를 추가하고, 세포를 각각 약 500만 개의 세포가 있는 두 가지 조건으로 나눕니다. 그런 다음 각 조건에 정확한 양의 사이토카인을 추가하고 세포를 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 세포를 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%에서 3일 동안 배양합니다.

배양 3일 후, 사이토카인 농도의 두 배로 신선한 T 세포 배지를 준비합니다. 각 웰에서 부피의 절반을 새 웰로 옮겨 세포를 재현탁하고 분할합니다. 그런 다음 새로 준비된 T 세포 배지를 각 웰에 동일한 부피의 T 세포 배지를 추가합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026