Isolation of Marginating Hepatic Leukocytes from a Mouse Liver(마우스 간에서 간 백혈구 가장자리 분리)

변연성 간, MH, 백혈구는 내피 세포로 둘러싸인 특수 간 혈관 또는 정현파의 벽에 부착되어 있는 것으로 발견됩니다. MH 백혈구는 염증에 반응하여 주변 조직으로 모집됩니다.

MH 백혈구를 수확하려면 누운 자세에서 안락사된 마우스로 시작합니다. 복막과 흉강을 절개하여 간과 심폐 복합체를 노출시킵니다.

비장, 위장관 및 관련 기관에서 간으로 혈액을 운반하는 문맥을 노출시키기 위해 장을 옮깁니다. 연동 펌프에 연결된 바늘을 문맥에 삽입합니다.

간에서 심장으로 산소가 제거된 혈액을 운반하는 주요 혈관인 하대정맥을 해부하여 관류 중에 관류액을 수집합니다.

짧은 기간 동안 낮은 유속으로 항응고제가 함유된 완충액으로 문맥을 통해 간을 관류합니다. 이 단계는 하대정맥 유출을 통해 간 혈관에서 비부착 세포가 있는 혈액을 제거하는 데 도움이 됩니다. 이 혈액에 오염된 관류액을 버리십시오.

이제 더 높은 유속으로 관류하십시오. 증가된 유량 및 전단 속도에서 강제 관류는 MH 백혈구와 혈관 내벽 사이의 접착을 방해하여 정현파 벽에서 MH 백혈구를 분리합니다.

MH 백혈구 및 기타 혈액 세포가 포함된 관류액을 수집하여 새 튜브로 옮깁니다. 원심 분리기. 추가 다운스트림 분석을 위해 MH 백혈구를 포함하는 펠릿을 재현탁합니다.

마우스 변연 간 백혈구를 수집하려면 호흡이 멈춘 직후 멸균 가위와 치아 조직 겸자를 사용하여 검상돌기까지 정중선 복부 절개를 합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 흉골을 들어 올리고 양쪽의 횡격막과 흉곽을 조심스럽게 자릅니다.

흉골에 지혈제를 고정하고 흉곽을 주둥이로 접어 심폐 복합체를 노출시킵니다. 복강 바깥쪽의 장을 동물의 왼쪽으로 이동하여 문맥을 노출시킵니다. 그런 다음 30게이지 바늘을 연동 펌프에 연결하고 비장 정맥의 주둥이가 있는 문맥에 삽입합니다.

흉강에서 관류액을 배액하고 수집할 수 있도록 횡격막 위의 하대정맥을 절단합니다. 그런 다음 분당 약 3밀리리터의 속도로 연동 펌프를 켜고 흉강 풀에서 혈액에 오염된 관류액의 첫 번째 밀리리터를 수집합니다. 3밀리리터가 모이면 펌프를 끕니다.

그런 다음 10밀리리터 주사기에 연결된 21게이지 버터플라이 바늘을 삽입한 후 흉강에서 10밀리리터의 관류액이 수집될 때까지 분당 최대 4밀리리터의 속도로 관류를 다시 시작합니다. 간이 연한 갈색으로 변하면 관류를 종료하십시오. 그런 다음 관류액을 15밀리리터 튜브로 옮깁니다. 원심분리한 다음 상층액을 흡인합니다.