말초 혈액 단핵 세포에서 자연 살해 세포의 생체 외 확장

자연 살해, NK 세포는 종양과 미생물 감염을 제거하는 큰 과립 림프구입니다.

생체 외 NK 세포 확장을 위해 NK 세포를 포함한 이질적인 림프구 집단을 포함하는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 현탁액을 섭취합니다. NK 세포를 활성화하고 확장하는 데 필요한 막 결합 인터루킨 21, mIL-21을 발현하는 조사된 피더 세포(비증식 림프모세포양 세포)를 추가합니다.

바닥에 가스 투과성 막이 있는 특수 배양 우물에 공동 배양을 추가하여 가스 교환을 허용합니다. 세포는 계대를 필요 없이 오랜 기간 동안 정착하고 증식합니다.

인터루킨 2, IL-2 및 인터루킨 15, IL-15 — NK 세포 증식을 위한 사이토카인을 첨가합니다. 생리학적 조건에서 적절한 기간 동안 배양합니다.

피더 세포의 mIL-21은 NK 세포의 특정 이종이량체 수용체에 결합합니다. 외인성 IL-15 및 IL-2는 각각의 수용체에 결합합니다. 결합은 유전자 발현을 활성화하는 다양한 다운스트림 신호 전달 경로를 유도하여 세포 노화를 제한하고 NK 세포 증식을 연장합니다.

유세포 분석을 사용하여 일정한 시간 간격으로 NK 세포 확장을 평가합니다.

기록된 데이터를 플로팅하여 세포의 팽창 속도와 순도(표적 NK 세포 유형의 선택적 성장)를 분석합니다. 잠복기 동안의 다양한 팽창은 높은 순도를 유지하면서 지속적인 증식을 나타냅니다.

말초 혈액 단핵 세포 또는 PBMC 및 100개의 감마선 조사된 221-mIL-21 세포를 10 밀리리터의 R-10 배지와 함께 400g에서 5분 동안 원심분리 하여 별도로 세척합니다.

원심분리 후, 유세포 분석을 위해 1 x 10⁶ PBMC를 저장하고, 5 x 10⁶ PBMC를 10 x 10⁶ 100 감마선 조사된 221-mIL-21 세포와 특수 6웰 플레이트에 혼합합니다. 인간 인터루킨-2 및 인간 인터루킨-15가 보충된 R-10 배지 30밀리리터를 동일한 6웰 플레이트에 추가하고, 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소와 함께 배양하고 3-4일마다 배지를 교체합니다.

배양하는 동안 총 말초 혈액 자연 살해 또는 PBNK 세포 수, 생존력을 기록하고 3-4일마다 유세포 분석을 수행하여 NK 세포 팽창률을 계산합니다.