쥐 림프구 기관에서 인터페론-감마 분비 식별을 위한 분석

림프구 T 세포와 자연 살해 세포 또는 NK 세포에서 분비되는 사이토카인인 인터페론-감마 또는 IFN-γ는 병원체에 대한 면역 반응을 매개합니다.

제자리 IFN-γ 생산을 연구하기 위해, 모델 항원인 오브알부민을 인식하는 수용체를 발현하도록 조작된 형광 표지 T 세포를 이식한 마우스를 취하십시오.

오브알부민을 발현하도록 유전자 변형된 병원성 박테리아의 현탁액을 쥐에게 정맥 주사하여 전신 감염을 일으킵니다. 순환하는 박테리아는 이차 림프 기관인 비장에 도달하여 면역 세포와의 상호 작용을 촉진하여 병원체 제거를 돕습니다.

항원 제시 세포는 박테리아를 삼키고 항원을 표시합니다. T 세포는 수용체를 통해 항원에 결합하고 활성화되며 IFN-γ을 생성합니다.

박테리아에 감염된 대식세포 세포는 면역 매개체를 방출하고 표면의 활성화 리간드를 상향 조절합니다. 이러한 신호와 상호 작용하면 NK 세포가 활성화되어 IFN-γ을 생성합니다.

세포내 단백질 수송 억제제를 주입하여 IFN-γ 분비를 제한하여 세포내 축적을 유발합니다.

쥐 비장을 수확하십시오. 조직을 고정하고 절편을 돕기 위해 얼립니다. 냉동 마이크로톰을 사용하여 얇은 조직 절편을 생성하고 유리 슬라이드 위에 놓습니다. 표면 마커에 결합하는 NK 세포 특이적 항체와 세포내 IFN-γ를 염색하는 IFN-γ 특이적 항체를 추가합니다. 이러한 항체는 서로 다른 형광단으로 표지됩니다.

슬라이드를 형광 현미경 아래에 놓아 NK 세포와 T 세포 내부의 IFN-γ를 검출합니다.

고정액을 버리고 실온에서 5분 동안 5밀리리터의 PBS를 부드럽게 교반합니다. 그런 다음 PBS를 5밀리리터의 30% 자당으로 교체하고 조직 형태를 유지하기 위해 12-24시간 동안 배양합니다. 이제 오르간은 접시 바닥에 가라앉습니다.

샘플을 얼리려면 큰 용기에 드라이아이스를 넣고 그 안에 약 50밀리리터의 순수 메탄올과 몇 조각의 드라이아이스가 들어 있는 작은 용기를 넣습니다. 보푸라기가 없는 물티슈로 비장을 부드럽게 말리십시오. 베이스 몰드 바닥에 OCT 화합물 한 방울을 떨어뜨리고 비장을 몰드 안에 넣습니다. 기포가 생기지 않도록 주의하세요.

비장 위에 약 1밀리리터의 OCT를 추가합니다. 집게를 사용하여 메탄올이 OCT에 닿지 않도록 드라이아이스 수조의 메탄올 표면에 베이스 몰드를 증식시킵니다. OCT는 얼면 두꺼워지고 하얗게 변합니다. 아티팩트를 최소화하기 위해 가능한 한 빨리 조직을 얼리는 것을 잊