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면역학
0 조회수 • 4:25 분 • July 8th, 2025
고환의 정세관에는 생식 세포에 영양을 공급하는 세르톨리 세포가 포함되어 있습니다. 세르톨리 세포는 긴밀한 접합을 통해 연결되어 있으며 히알루론산이 풍부한 기저 기질에 단단히 부착되어 있습니다. 이러한 세르톨리 세포의 배열은 세뇨관으로의 면역 세포 진입을 조절하고 발달 중인 생식 세포가 분해되지 않도록 보호합니다.
Sertoli 세포를 분리하려면 마우스 고환에서 파생된 부분적으로 소화된 정세관이 들어 있는 튜브로 시작합니다. 이 세뇨관에는 세뇨관을 둘러싼 평활근 세포인 세뇨관 주위 세포가 부족합니다.
히알루론산의 가수분해에 필수적인 히알루로니다제와 DNase가 함유된 효소 칵테일로 세뇨관을 치료합니다.
히알루로니다아제는 세뇨관으로 들어가 기저 다당류인 히알루론산을 절단하여 기저 기질에서 세르톨리 세포 분리를 시작하고 생식 세포를 용액으로 방출합니다. DNase는 용액에서 DNA 오염 물질을 분해하여 세포 응집을 방지합니다.
효소적으로 소화된 세뇨관을 완충액으로 세척하여 잔류 효소, 세포 단편 및 생식 세포를 제거합니다. 소화된 세뇨관을 재현탁하고 현탁액을 바늘-주사기 어셈블리에 넣습니다.
용액을 반복적으로 통과시켜 유체역학적 전단을 생성하고 Sertoli 세포의 밀착 접합을 방해하여 잔여 생식 세포와 함께 단일 세포로 방출합니다.
세포 현탁액을 여과하여 세포 파편을 제거하고 단일 세포 현탁액을 얻습니다. 여과액을 원심분리하여 세포를 펠릿화합니다.
Sertoli 세포의 선택적 확장을 위해 무혈청 성장 배지에 세포를 재현탁합니다.
Sertoli 세포를 분리하려면 새로운 25밀리리터 피펫을 사용하여 침전된 세뇨관을 25밀리리터의 PBS에 완전히 재현탁합니다. 세뇨관이 12분 더 가라앉도록 한 후 동일한 피펫을 사용하여 같은 방법으로 세뇨관을 세 번 더 세척합니다. 그런 다음 세뇨관을 새 100밀리리터 스크류 캡 병에 옮기고 히알루로니다제-DNase-I 용액을 추가합니다. 또한 섭씨 32도의 흔들리는 수조에서 5분 동안 세뇨관을 소화합니다.
100배 배율의 광학 현미경 검사로 현탁액의 분취량을 확인합니다. 짧은 세뇨관, 관형 응집체 및 방출된 세포가 보여야 합니다. 관형 골재가 10분 동안 가라앉도록 합니다. 그런 다음 새로운 25밀리리터 피펫을 사용하여 상청액을 제거하고 응집체를 PBS 25ml로 4회 세척하고 각 세척 사이에 10분의 침전
을 둡니다.오염된 PTC 개체수가 감소했을 것입니다. 마지막 세척 후 RPMI
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