자가면역 뇌척수염을 유발하기 위한 항원 보조 에멀젼 제조

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 중추신경계 질환입니다. 자가항체는 뉴런의 수초에 있는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)을 표적으로 삼아 미엘린 파괴와 신경 변성을 유발합니다.

마우스의 EAE 유도는 면역 반응을 강화하기 위해 박테리아 항원을 포함하는 보조제와 혼합된 자가항원 MOG의 항원 보조제 에멀젼을 주입해야 합니다.

에멀젼을 준비하려면 균질화 튜브에 MOG의 수성 현탁액을 취하십시오. 항원 분해를 방지하기 위해 튜브를 얼음 위에 놓습니다.

조제(오일상에 분산된 비활성화된 병원성 박테리아)를 추가합니다. 흔들리는 균질화기 안에 튜브를 넣습니다. 흔들림은 유체에 난류를 일으켜 에멀젼을 생성합니다.

현미경으로 보면 에멀젼은 연속 유상 내에서 MOG를 함유한 균일하게 분산된 미세 크기의 수성 물방울을 보여줍니다. 에멀젼의 균질성은 질병 유도의 더 높은 재현성을 보장합니다.

수성 쥐 균주에 에멀젼을 주입하려면 튜브 전면에 주사기를 부착하고 에멀젼을 튜브로 옮깁니다. 마취된 마우스를 가져다가 에멀젼을 피하 주입합니다.

주입 시 에멀젼의 오일은 느리고 지속적인 항원 방출을 보장하여 면역 반응 지속 시간을 증가시킵니다.

에멀젼의 비활성화된 병원체는 국소적인 염증 반응을 일으켜 면역 세포를 주사 부위로 모집합니다. 모집된 면역 세포는 방출된 MOG 항원을 인식하고 항체 생성을 자극하여 EAE를 유도합니다.

나사 캡이 있는 튜브를 얼음 위에서 사용할 시약에 넣습니다. 다음으로 에멀젼 성분을 추가합니다. 먼저 PBS, 그 다음에는 펩타이드, CFA 슬러리, 마지막으로 IFA입니다. 캡이 있는 튜브를 여러 번 조였다 풀어 단단히 닫습니다. 튜브를 손으로 5-10초 동안 세게 흔들어 시약을 미리 혼합합니다.

튜브를 흔들리는 균질화기에 넣고 막대로 고정합니다. 속도를 최고 설정으로 설정하고 시간을 60초로 설정합니다. 실행이 끝나면 튜브를 얼음 위에 3분 동안 놓고 동일한 설정으로 실행을 1-2회 더 반복합니다. 튜브를 300 x g으로 1분 동안 원심분리하여 갇힌 공기를 제거하고 에멀젼을 압축합니다. 튜브에서 캡을 제거하고 플런저를 튜브에 삽입한 다음 에멀젼 상단에 도달할 때까지 천천히 아래로 누릅니다. 튜브 바닥에 있는 스냅오프 인클로저를 비틀어 제거합니다.

그런 다음 모든 주사 주사기에서 플런저를 제거하고 주사 주사기에 바늘을 추가합니다. 그런 다음 주입 주사기의 뒤쪽 끝을 튜브 하단의 전용 잠금 장치에 부착하고 짧게 비틀어 잠급니다. 플런저를 부드럽게 밀어 튜브에서 주입 주사기로 에멀젼을 옮깁니다.

에멀젼이 주사 주사기의 0.15밀리리터 눈금에 도달하면 중지합니다. 주입 주사기를 튜브에서 분리하고 주사기에 공기가 들어가지 않도록 주의하면서 플런저를 조심스럽게 삽입하십시오. 에멀젼이 바늘에서 나올 때까지 플런저를 밀고 튜브에 있는 나머지 에멀젼에 대해 이 과정을 반복합니다.

유중수 입자의 크기를 분석하려면 현미경 슬라이드에 에멀젼을 아주 적은 방울로 추가하고 커버슬립으로 바른 다음 원을 그리며 세게 밀어 에멀젼을 평평하게 만듭니다.

400배 배율의 위상차 현미경으로 번진 에멀젼을 검사하고 에멀젼의 단층이 있는 필드에 초점을 맞춥니다. 작고 균일한 회색 또는 흰색 입자가 보이는지 확인하십시오.