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면역학
0 조회수 • 5:41 분 • July 8th, 2025
세포 스트레이너에서 마우스 비장과 림프절을 침용합니다. 비장세포와 림프구를 수집하기 위해 적절한 완충액으로 스트레이너를 세척합니다.
비오티닐화 항체 칵테일 및 비-CD8+ 세포에 결합하는 자성 항비오틴 마이크로비드와 함께 세포를 배양합니다.
세포 현탁액을 자기 컬럼에 통과시킵니다. 자력으로 인해 비드에 결합된 비-CD8+ 세포는 컬럼 벽에 결합하고 CD8+ T 세포는 용리됩니다.
용출된 세포를 인공 항원 제시 세포인 aAPC와 함께 배양합니다. 이들은 항원이 탑재된 주요 조직적합성 복합체-면역글로불린 융합 단백질, MHC-Ig 및 항-CD28 항체로 기능화된 자성 나노입자입니다.
항원이 탑재된 MHC-Ig는 항원 특이적 CD8+ T 세포의 별개의 수용체에 결합합니다. 항-CD28 항체는 T 세포 CD28 수용체와 상호 작용하여 T 세포 활성화를 시작합니다.
자성 나노입자와 세포 혼합물이 들어 있는 튜브를 마그네틱 스탠드에 놓습니다. aAPC 결합 CD8+ T 세포는 자기장에 끌리는 반면 비특이적 CD8+ T 세포는 부유 상태로 유지됩니다. 상청액을 제거합니다.
마그네틱 스탠드에서 튜브를 제거합니다. aAPC 결합 세포를 T 세포 성장 인자 함유 배지에 재현탁합니다. 멀티웰 플레이트에 파종하십시오.
성장 인자는 항원 특이적 CD8+ T 세포 확장을 유도합니다.
항원 특이적 CD8 양성 T 세포를 분리하기 위해, 야생형 C57Black/6j 마우스의 비장 및 림프절을 PBS 헹굼과 함께 멸균 70마이크로미터 세포 여과기를 통해 침용하고, 제조업체의 지침에 따라 비접촉 CD8 양성 T 세포 분리 키트를 사용하여 비-CD8 양성 T 세포를 제거합니다.
계수 후, 분리된 CD8 양성 T 세포를 원심분리하여 수집하고, 0.5% 소 혈청 알부민과 2밀리몰 EDTA를 보충한 100마이크로리터의 PBS에 펠릿을 재현탁합니다.
그런 다음, 멸균된 5밀리리터 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브에서 1시간 동안 섭씨 4도에서 지속적으로 혼합하면서 1시간 동안 1 x 10 6개의 분리된 CD8 양성 T 세포당 1 x 1011 펩타이드 로딩 MHC-Ig가 있도록 나노입자 인공 항원 제시 세포와 함께 세포를 배양합니다.
배양이 끝나면 나노입자 세포 현탁액을 시연된 대로 마그네틱 스탠드에서 3회 세척하고, 인공 항원 제시 세포와 농축된 CD8 양성 T 세포를 1% T 세포 성장 인자가 포함된 500마이크로리터의 신선한 보충 배지에 다시 현탁합니다.
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