Radiolabeled 단클론 항체를 사용한 Murine T Helper 림프구 라벨링

0 조회수3:28 • July 8th, 2025

닭 난아부민 펩타이드에 특이적인 T 세포 수용체, TCR을 운반하는 쥐 T 헬퍼, Th 림프구를 방사성 표지하기 위해 원하는 방사성 활성을 가진 방사성 표지 단클론 항체, mAb가 들어 있는 튜브를 복용합니다.

상기 mAb는 상기 쥐 Th 림프구막상에서 발현되는 TCR에 특이적인 mAb를 포함한다. 킬레이트제는 mAb와 양전자 방출 구리 동위원소를 접합하여 안정적인 복합체를 형성합니다.

방사성 표지된 mAb를 식염수로 희석합니다. 다음으로, 희석된 방사성 표지 mAb를 Th 림프구 현탁액이 포함된 멀티웰 플레이트에 추가합니다. 잠시 인큐베이팅합니다.

배양 내에서 방사성 표지된 mAb는 Th 림프구막의 TCR에 결합합니다. 배양 후, 세포 현탁액을 새로운 튜브로 옮깁니다.

원심 분리기. 결합되지 않은 방사성 표지 항체를 포함하는 상청액을 버립니다. Th 림프구를 배지에 재현탁하고 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 장기간 배양합니다.

방사성 표지된 mAb-TCR 결합은 원형질막의 세포질 쪽으로 어댑터 단백질 모집을 유발하며, 클라트린 트리스켈리온이 결합하여 클라트린 코팅 구덩이를 형성합니다.

보조 단백질은 원형질막에서 소포를 꼬집는 데 도움을 주어 방사성 표지된 mAb-TCR 복합체가 세포질로 내재화되는 것을 촉진합니다. 결국 TCR은 Th 림프구막에서 재발현됩니다.

방사성 표지된 Th 림프구는 추가 실험을 위한 준비가 되었습니다.

닭 난아알부민 특이적 TH1 세포 방사성 표지의 경우, 먼저 선량 교정기를 사용하여 관심 있는 T 세포 특이적 방사성 항체 37메가베크렐을 사량 없이 주사기에 끌어 넣습니다.

다음으로, 항체를 반응 컵에 분배하고 채취한 양에서 주사기의 남은 반응량을 측정하고 뺍니다. 그런 다음 컵에 식염수 1밀리리터를 첨가하여 밀리리터당 37메가베크렐 용액을 생성합니다.

다음으로, 0.5ml의 완전 배지에 있는 여섯 번째 OVA-TH1 세포에 10배 2회를 48웰 플레이트의 각 웰에 첨가한 다음 20마이크로리터의 방사성 표지 항체 용액을 첨가합니다. 방사선에 안전한 섭씨 37도 및 이산화탄소 7.5% 세포 배양 인큐베이터에서 30분 후, 방사성 표지된 세포를 섭씨 37도 PBS 10밀리리터에서 2회 세척하기 위해 50밀리리터 원뿔형 튜브에 모입니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026