마우스 모델에서 불변 자연 살해 T 세포 분리

0 조회수3:35 • July 8th, 2025

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마우스에 합성 당지질을 복강 내 주사하는 것으로 시작합니다.

항원 제시 세포 또는 APC는 당지질을 내재화하고 비고전적 MHC 분자 CD1d를 통해 제시합니다.

APC는 비장으로 이동하여 불변의 자연 살해 T 세포 또는 iNKT 세포와 상호 작용하여 iNKT 세포 활성화 및 증식을 유도합니다.

비장을 수확하십시오. 기계적으로 해리하여 단일 세포 현탁액을 생성합니다.

세포를 튜브로 옮깁니다. 밀도 구배 배지를 추가하고 원심분리하여 림프구를 분리합니다.

림프구를 수집합니다. iNKT 세포와 상호 작용하는 당지질 항원 로딩 형광단 표지 CD1d 사량체를 추가합니다.

결합되지 않은 사량체를 제거합니다. 사량체 결합 형광단에 결합하는 자성 마이크로비드로 오버레이합니다.

결합되지 않은 비드를 제거하고 세포 현탁액을 마그네틱 컬럼에 로드합니다.

자기장 아래에서 비드에 결합된 iNKT 세포는 컬럼에 유지되고 나머지 세포는 흐릅니다.

자기장에서 컬럼을 제거합니다. 용출 완충액을 첨가하여 iNKT 세포를 용리합니다.

정상 DBA/1 마우스에 체중 킬로그램당 0.1밀리그램의 용량으로 알파-GalCer를 복강 내 주사합니다. 모델링 3일 후, 마취 후 마우스의 비장을 분리합니다. 200메쉬 체에서 비장을 자르고 분쇄하여 단일 세포 현탁액을 준비합니다. PBS로 세포 현탁액을 세척합니다. 200배g에서 5분 동안 원심분리하고 상청액을 버립니다.

1밀리리터의 전혈 및 조직 희석액으로 세포를 재현탁합니다. 마우스 림프구 분리 배지 3밀리리터를 첨가한 다음 실온에서 300배g에서 20분 동안 세포를 원심 분리합니다.

iNKT 세포를 정제하려면 10 내지 7 세포를 섭씨 4도 PBS 100마이크로리터로 재현탁합니다. 10마이크로리터의 알파-GalCer 로딩 CD1d 테트라머-PE를 넣고 어둠 속에서 섭씨 4도에서 15분 동안 배양합니다. 세포를 PBS로 두 번 세척하고 80마이크로리터의 PBS에 재현탁합니다. 20마이크로리터의 항-PE 마이크로비드를 넣고 어둠 속에서 섭씨 4도에서 20분 동안 배양합니다. PBS로 두 번 세척하고 500마이크로리터의 PBS로 세포를 재현탁합니다.

선별 컬럼을 MACS 선별기의 자기장에 놓고 500마이크로리터의 PBS로 헹구십시오. 준비된 세포 현탁액을 분류 컬럼에 추가하고 플로우 스루를 수집한 다음 PBS 완충액으로 세 번 헹굽니다. 자기장을 제거하고 1밀리리터의 PBS 완충액을 분류 컬럼에 추가합니다. 일정한 압력으로 플런저를 빠르게 밀어 표지된 세포를 수집 튜브로 밀어 넣고 정제된 iNKT 세포를 얻습니다. 자동 세포 계수기로 계수합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026