제대혈 조혈 줄기세포를 분리하여 인간 면역계 마우스를 생성하다

CD34⁺ 조혈모세포 또는 조혈모세포를 포함한 인간 제대혈 세포로 시작합니다.

항체를 추가하여 세포 Fc 수용체를 차단하여 HSC 특이적 마그네틱 비드의 비특이적 결합을 방지합니다.

CD34⁺ HSC를 표적으로 하는 항체 코팅 마그네틱 비드를 도입합니다. 원심분리하여 상청액을 버립니다.

세포를 완충액에 재현탁합니다. 비드로 결합된 HSC를 유지하기 위해 자기 분리기를 통과시킵니다. 결합되지 않은 세포가 통과합니다.

HSC를 수집하기 위해 자기장을 제거합니다.

세포를 원심분리하고 성장 배지에 재현탁합니다. 세포를 플레이트하고 배양합니다.

배지에는 조혈모세포 생존 및 확장을 촉진하는 성장 인자와 사이토카인이 포함되어 있습니다.

세포를 수확하십시오. 냉동 배지를 넣고 냉동 바이버로 옮기고 얼립니다.

인간 면역 체계 또는 HIS, 마우스 모델을 생성하려면 HSC를 해동합니다. 미리 예열된 배지에 첨가하십시오.

세포를 원심분리하고 완충액에 재현탁합니다.

세포는 HIS 모델 생성을 위해 면역결핍 마우스 새끼에게 주입할 준비가 되었습니다.

시작하려면 제대혈에서 분리된 CD34 양성 세포 펠릿을 1 x 10⁸ 세포당 300마이크로리터의 자기 세포 분리기 완충액에 재현탁합니다. 1 x 10⁸ 세포당 100마이크로리터의 FcR 차단 시약을 첨가한 다음 1 x 10⁸ 세포당 100마이크로리터의 CD34 양성 마그네틱 비드를 첨가하고 섭씨 4도에서 30분 동안 배양합니다.

다음으로, 1 x 10⁸ 세포당 5 밀리리터의 자기 세포 분리기 완충액을 첨가하고 섭씨 4도에서 10분 동안 360g으로 회전시킵니다. 세척 단계를 반복하고 '미분획'이라고 표시된 15밀리리터 원뿔형 튜브에 자기 세포 분리기 완충액 1억 세포당 500마이크로리터에 펠릿을 재현탁합니다. CD34 음성 및 CD34 양성의 15밀리리터 튜브 두 개에 라벨을 붙입니다. 세 개의 튜브를 냉각 선반에 놓습니다.

생물 안전 캐비닛의 자동 자기 세포 분리기에서 2열 양성 선택 프로그램을 사용하여 세포를 분리합니다. 다음으로, CD34 양성 인간 줄기 세포를 증식 및 동결하기 위해 원고에 기재된 대로 제대혈 또는 CB 배지를 준비하고 0.22미크론 필터를 통과시킵니다. CD34 양성 세포를 CB 배지 밀리리터당 100,000개에 재현탁하고 섭씨 37도에서 배양합니다.

3일째에 사이토카인이 없는 동일한 부피의 CB 배지를 플라스크에 추가합니다. 5일째에 확장된 CD34 양성 세포를