쥐 모델에서 자가면역 관절염에 대한 세포 기반 치료법

난아알부민 특이적 수용체를 발현하는 iPSC 유래 조절 T 세포 또는 Treg를 섭취하십시오. 구속된 쥐의 꼬리 정맥에 주입하십시오.

세포는 무릎 관절낭의 내부 표면을 감싸는 활막에 도달합니다.

다음으로, 보조제로 유화된 메틸화 소 혈청 알부민 또는 mBSA를 투여합니다.

보조제는 MHC 분자를 통해 단편을 처리하고 제시하는 항원 제시 세포(APC)에 대한 mBSA의 제시를 향상시킵니다.

APC는 림프절로 이동하여 T 세포 활성화를 유도합니다. 활성화된 T 세포는 무릎 관절로 이동합니다.

mBSA 단독과 mBSA를 오브알부민과 함께 왼쪽 및 오른쪽 무릎 관절에 각각 주입합니다.

왼쪽 무릎에서 APC는 활성화된 T 세포에 mBSA 단편을 제시하여 전염증성 사이토카인 방출을 유발하고 관절염이라고 하는 조직 손상 및 관절 부종을 유발합니다.

오른쪽 무릎에서 Treg는 난알부민을 제시하는 APC와 상호 작용하여 항염증 사이토카인을 방출하여 조직 손상과 관절 부종을 줄여 관절염을 개선합니다.

관심 세포 배양물을 트립신으로 분리하고 각 세포 유형을 10밀리리터의 신선한 배지에 재현탁하는 것으로 시작합니다. 각 세포 배양물을 새로운 10cm 접시에 도금하고 피더 세포가 세포 배양 인큐베이터에 부착되도록 합니다. 30분 후, 부유 iPSC를 수집하고 배양물을 개별 70미크론 세포 스트레이너에 통과시켜 계수를 위해 세포 클러스터를 제거합니다.

각 배양액을 1.5 x 10 7 세포 농도로 차가운 PBS에 재현탁하고 필요에 따라 다시 여과합니다. 그런 다음, 4주에서 6주령의 암컷 C57BL6 마우스를 한 번에 한 마리씩 작은 동물 구속기에 배치하고, 마우스당 200마이크로리터의 한 종류의 세포를 각 동물의 꼬리 정맥으로 입양 옮긴다.

다이얼 게이지 캘리퍼스를 사용하여 양쪽 무릎의 부종을 측정하여 기준선 측정을 설정합니다. 세포 이식 10일 후, 1밀리리터 주사기를 사용하여 각 실험 동물의 꼬리 기저부에 있는 완전한 프로인트 보조제로 유화된 메틸화 BSA 100마이크로그램을 마우스에 주입합니다.

세포 이식 17일 후, PBS 10마이크로리터에 메틸화 BSA 20마이크로그램을 왼쪽 무릎 관절에 관절 내 주사하고, 메틸화 BSA 20마이크로그램, PBS 10마이크로리터에 전체 오브알부민 100마이크로그램을 마취된 입양 이식 동물의 오른쪽 무릎 관절에 주사하여 관절염을 유도합니다.

관절염을 유발한 후 7일 후에 무릎 직경의 증가율을 계산하기 위해 무릎을 다시 측정하고 슬개골을 외과적으로 절제합니다. 포르말린으로 관절을 고정하십시오. 그런 다음 EDTA에서 석회질을 제거한 후 무릎을 파라핀에 매립하고 조직화학적 염색 및 분석을 위해 4미크론 절편을 얻습니다.