이중 인간화 BLT(Bone-Marrow, Liver, Thymus) 마우스 모델 생성

면역 세포가 부족한 마취된 면역결핍 마우스부터 시작하십시오.

골수에서 기존 줄기 세포를 제거하기 위해 치사율 이하의 X선으로 마우스를 치료합니다.

마우스를 해부하고 인간 태아 간 및 흉선 조직 조각을 신장과 캡슐 사이에 전달합니다.

절개 부위를 닫습니다.

이식된 간과 흉선 조직이 성장하여 장기를 닮은 세포 응집체인 오가노이드를 형성합니다.

회복 후 인간 조혈모세포 또는 조혈모세포를 꼬리 정맥에 주입합니다.

주입된 조혈모세포는 흉선 오가노이드와 골수로 이동하여 다양한 인간 면역 세포로 분화합니다.

기존 장내 미생물을 죽이기 위해 항생제가 보충된 물을 마우스에 제공합니다.

구강 튜브를 사용하여 인간 분변 미생물을 마우스의 장에 직접 도입하여 미생물 집락화를 촉진합니다.

그 결과 인간 면역 체계와 장내 미생물을 특징으로 하는 이중 인간화 BLT-마우스 모델이 개발되었습니다.

간과 흉선 조직을 왼쪽 신장 캡슐에 이식하려면 먼저 마우스를 후드에 넣습니다. 수술 당일, 마우스를 체중 용량 그램당 12센티그레이의 전신 치사 이하 조사로 치료한다. 적절한 수준의 진정을 확인한 후 각 마우스를 왼쪽 외측 및 내측 주위로 면도합니다. 동물의 눈에 안용 연고를 바르고 필요에 따라 귀표를 바르고 요오드 3개와 70% 이소프로판올 스크럽으로 피부를 소독합니다.

피부가 준비되면 겸자를 사용하여 1 내지 1.6밀리미터 입방체의 인간 태아 간 조직 조각을 투관침에 넣은 다음 1 내지 1.6밀리미터의 입방체 인간 태아 흉선 조직 조각 1개를 적재합니다. 집게를 사용하여 피부를 들어 올리고 메스를 사용하여 피부를 세로로 작은 자릅니다. 컷을 마우스 왼쪽에서 1.5-2cm까지 확장하고 집게를 사용하여 근육층을 들어 올립니다. 가위를 사용하여 근육층을 세로로 열고 필요에 따라 상처를 확장하여 신장을 노출시키고 신장을 둘러싼 지방 조직을 부드럽게 잡습니다.

메스를 사용하여 신장 캡슐의 후쪽 끝을 1-2mm 절개하고 미리 로드된 투관침을 신장의 장축과 평행하게 절개 부위에 천천히 삽입합니다. 신장 캡슐과 신장 사이의 조직을 풀어주고 신장과 장을 정상 위치로 되돌립니다. 그런 다음 봉합사를 사용하여 근육층을 봉합하고 수술용 스테이플을 사용하여 피부를 봉합합니다. 마우스를 완전히 누운 자세가 될 때까지 모니터링하면서 고압멸균된 마이크로 아이솔레이터 케이지에 넣습니다. 수술 6시간 후 생쥐를 열 램프 아래에 놓고 70% 이소프로판올로 소독합니다.

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