다가 표시 외막 소포 백신 생성

0 views • 5:41 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

폴리머에 결합된 표적 플라스미드를 포함하는 형질감염 폴리플렉스를 섭취하십시오. 플라스미드는 펩타이드 태그와 친화성 태그에 융합된 바이러스 항원을 암호화합니다.

폴리플렉스를 포유류 세포와 함께 배양하여 엔도좀 내부의 폴리플렉스를 내재화합니다.

폴리머는 소포 파열을 유도합니다. 방출된 플라스미드는 세포외에서 분비되는 바이러스 항원을 발현합니다.

항원과 오염 물질을 포함하는 상청액을 수확합니다. 낮은 농도로 경쟁제를 첨가하십시오.

친화성 크로마토그래피 컬럼에 로드합니다.

친화성 태그는 컬럼 레진에 결합하여 항원을 고정시키는 반면, 경쟁 제제는 비특이적 결합을 감소시킵니다.

경쟁

제제를 낮은 농도로 흐르게 하여 약하게 결합된 오염 물질을 제거합니다.

경쟁

제제 농도를 증가시켜 강하게 결합된 항원을 대체하여 용출합니다.

표면 결합 포획 단백질과 함께 박테리아 외막 소포 또는 OMV를 도입하고 배양합니다.

항원 펩타이드 태그는 포획 단백질에 결합하여 다가 항원 디스플레이가 있는 OMV 백신을 형성합니다.

OMV SpyCatcher 정화를 수행합니다. 박테리아 용액을 원심분리하는 것부터 시작하십시오. 0.22마이크로미터 멤브레인 필터로 상청액을 걸러낸 다음 중공사 컬럼을 사용하여 농축합니다. 농축액을 0.22마이크로미터 멤브레인 필터로 여과한 후 초원심분리기를 사용하여 섭씨 4도에서 150,000배g으로 2시간 동안 원심분리한 후 피펫으로 상청액을 버린다. 침전물을 PBS로 재현탁하고 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.

RBD-SpyTag 형질감염을 수행하려면 적절한 진핵 발현 시스템을 선택하는 것부터 시작하고, 회복 후 섭씨 37도에서 분당 130회전으로 밤새 세포를 배양합니다. 20마이크로리터 HEK293F의 세포 용액을 자동 세포 계수기에 추가합니다. 셀 수를 기록합니다. 밀리리터당 10에서 6번째 세포의 1배로 농도를 조절한 후 섭씨 37도에서 분당 130회전으로 4시간 동안 세포를 배양합니다.

0.22마이크로미터 멤브레인 필터를 통해 RBD-SpyTag 플라스미드를 여과하고 최종 부피가 10밀리리터가 될 때까지 300마이크로그램의 플라스미드를 세포 배양 배지에 첨가합니다. 10초 동안 흔듭니다. 수조에서 PEI를 섭씨 65도로 가열합니다. PEI 0.7밀리리터와 세포 배양액 9.3밀리리터를 혼합하고 간차적으로 10초 동안 흔듭니다.

PEI 용액에 플라스미드 용액을 첨가합니다. 혼합물을 간헐적으로 10초 동안 흔들고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다. 혼합물을 280밀리리터의 세포 배양 배지에 첨가하고 섭씨 37도에서 분당 130회전으로 5일 동안 배양합니다.

다음으로 RBD-SpyTag 정제를 수행합니다. 세포를 섭씨 25도에서 6,000배 g으로 20분 동안 원심분리하는 것으로 시작합니다. 피펫을 사용하여 상청액을 수집합니다. 2밀리리터의 니켈-NTA 아가로스로 컬럼을 만들고 PBS로 세 번 세척합니다.

이미다졸을 세포 상청액에 첨가하여 최종 농도를 20밀리몰로 만들고 세포 상청액을 로드합니다. 세척을 위해 20밀리몰의 이미다졸을 함유한 PBS 3컬럼을 추가하고 세척 분획을 수집합니다. 저농도에서 고농도의 이미다졸을 함유한 3개의 컬럼 부피의 PBS로 그래디언트 용리합니다. 각 농도에 대해 두 번 용리합니다.

BCA 방법으로 단백질 농도를 측정하려면 표준 BSA 단백질 용액을 밀리리터당 2밀리그램에서 0.0625밀리그램으로 연속적으로 희석합니다. 정제된 OMV SpyCatcher 및 RBD-SpyTag를 10배 희석합니다. 그런 다음 BCA 작업 용액 A와 B를 50:1의 비율로 혼합합니다. 희석된 단백질 용액을 첨가하고 BCA 작업 용액과 혼합합니다. 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다. 각 웰의 562나노미터에서 흡광도를 측정하고 표준 곡선에서 단백질 농도를 계산합니다.

OMV SpyCatcher와 RBD-SpyTag의 생체 접합을 수행하려면 PBS의 RBD-SpyTag에 OMV SpyCatcher를 40:1 비율로 혼합합니다. 섭씨 15도에서 분당 4회전으로 밤새 혼합물을 혼합하기 위해 수직으로 회전합니다. OMV SpyCatcher 정제와 유사한 절차를 사용하여 PBS 용액을 사용하여 OMV RBD를 정제합니다.

07:42

효소와 항 원에 대 한 Nonrecombinant 디스플레이 시스템으로 포자 흡착

Related Videos

0 Views

06:40

자성 나노 물질의 생체 기능화

Related Videos

0 Views

06:08

엑소좀 기반 도파민 운반체 시스템의 공식화 및 특성화

Related Videos

0 Views

04:46

무세포 시스템을 이용한 나노디스크 안정화 막 단백질 항원 합성

Related Videos

0 Views

03:09

포유류 시스템을 통한 인플루엔자 바이러스 유사 입자 생성 기술

Related Videos

0 Views

09:27

형광 태그 바시니아 바이러스 단백질의 효율적인 생성을위한 방법론

Related Videos

0 Views

13:36

아데노 바이러스 혈청 형 5 된 벡터 백신 접근 방법의 개발을위한 항원 캡시드-설립 전략을 활용

Related Videos

0 Views

06:17

표현과 예방 접종에 대한 바이러스 입자의 정제

Related Videos

0 Views

12:42

종양 대상 Immunomodulation에 대 한 paramyxoviruses: 설계 및 평가 전 비보

Related Videos

0 Views

10:58

삼중 에피토프 프리젠 테이션을 필요로하는 백신을위한 대장균- 발현 자가 조립 단백질 나노 입자의 생산

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026