다가 표시 외막 소포 백신 생성

폴리머에 결합된 표적 플라스미드를 포함하는 형질감염 폴리플렉스를 섭취하십시오. 플라스미드는 펩타이드 태그와 친화성 태그에 융합된 바이러스 항원을 암호화합니다.

폴리플렉스를 포유류 세포와 함께 배양하여 엔도좀 내부의 폴리플렉스를 내재화합니다.

폴리머는 소포 파열을 유도합니다. 방출된 플라스미드는 세포외에서 분비되는 바이러스 항원을 발현합니다.

항원과 오염 물질을 포함하는 상청액을 수확합니다. 낮은 농도로 경쟁제를 첨가하십시오.

친화성 크로마토그래피 컬럼에 로드합니다.

친화성 태그는 컬럼 레진에 결합하여 항원을 고정시키는 반면, 경쟁 제제는 비특이적 결합을 감소시킵니다.

경쟁

제제를 낮은 농도로 흐르게 하여 약하게 결합된 오염 물질을 제거합니다.

경쟁

제제 농도를 증가시켜 강하게 결합된 항원을 대체하여 용출합니다.

표면 결합 포획 단백질과 함께 박테리아 외막 소포 또는 OMV를 도입하고 배양합니다.

항원 펩타이드 태그는 포획 단백질에 결합하여 다가 항원 디스플레이가 있는 OMV 백신을 형성합니다.

OMV SpyCatcher 정화를 수행합니다. 박테리아 용액을 원심분리하는 것부터 시작하십시오. 0.22마이크로미터 멤브레인 필터로 상청액을 걸러낸 다음 중공사 컬럼을 사용하여 농축합니다. 농축액을 0.22마이크로미터 멤브레인 필터로 여과한 후 초원심분리기를 사용하여 섭씨 4도에서 150,000배g으로 2시간 동안 원심분리한 후 피펫으로 상청액을 버린다. 침전물을 PBS로 재현탁하고 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.

RBD-SpyTag 형질감염을 수행하려면 적절한 진핵 발현 시스템을 선택하는 것부터 시작하고, 회복 후 섭씨 37도에서 분당 130회전으로 밤새 세포를 배양합니다. 20마이크로리터 HEK293F의 세포 용액을 자동 세포 계수기에 추가합니다. 셀 수를 기록합니다. 밀리리터당 10에서 6번째 세포의 1배로 농도를 조절한 후 섭씨 37도에서 분당 130회전으로 4시간 동안 세포를 배양합니다.

0.22마이크로미터 멤브레인 필터를 통해 RBD-SpyTag 플라스미드를 여과하고 최종 부피가 10밀리리터가 될 때까지 300마이크로그램의 플라스미드를 세포 배양 배지에 첨가합니다. 10초 동안 흔듭니다. 수조에서 PEI를 섭씨 65도로 가열합니다. PEI 0.7밀리리터와 세포 배양액 9.3밀리리터를 혼합하고 간차적으로 10초 동안 흔듭니다.

PEI 용액에 플라스미드 용액을 첨가합니다. 혼합물을 간헐적으로 10초 동안 흔들고