박테리아 병원체에 감염된 Ex vivo Ovine Wounded Skin 모델 생성

항생제가 없는 배지에서 양의 이마에서 얻은 사전 멸균된 피부 생검 절편을 채취하십시오.

이 섹션은 외부 표피와 기본 진피층으로 구성됩니다.

배지를 제거하고 완충액을 사용하여 절편을 세척합니다.

단면을 원형으로 자르고 최상층을 제거합니다. 이것은 장벽을 무너뜨려 피부에 상처 침대를 생성합니다.

상처를 입은 절편을 항생제가 없는 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트의 투과성 멤브레인 인서트로 옮깁니다.

병원성 박테리아의 현탁액을 상처 부위에 도입하고 배양합니다.

배양하는 동안 상처 침대는 박테리아 부착을 위한 조직 표면과 박테리아 성장을 지원하는 영양분을 제공합니다.

이를 통해 박테리아가 상처 부위 전체에 증식하고 확산되어 감염이 발생합니다.

피부 샘플을 감염시키려면 400마이크로리터의 예열된 항생제가 없는 배지로 신선한 24웰 플레이트를 준비하고 멸균 겸자를 사용하여 24웰 인서트를 추가합니다. 피부 샘플에서 배지를 제거하고 500마이크로리터의 멸균 PBS로 세척한 다음 세척액을 제거합니다.

멸균 겸자를 사용하여 샘플을 웰 바닥에 부드럽게 고정합니다. 4mm 펀치 생검을 사용하여 피부 샘플을 1-2mm의 대략적인 깊이까지 관통하고 중앙 상처 피판을 만듭니다. 그런 다음 15번 칼날 메스와 멸균 치아 Allis 조직 겸자를 사용하여 상처 피판의 최상층을 제거합니다.

모든 샘플이 상처를 입으면 멸균 겸자를 사용하여 24웰 인서트로 옮깁니다. 15마이크로리터의 박테리아 접종물을 상처 침대에 피펫팅한 후 가습된 조직 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양합니다. 배양 기간이 길어지려면 배지를 제거하고 24시간마다 새 배지로 교체한 다음 동일한 조건에서 플레이트를 배양합니다.