종양 스페로이드에 침투하는 T 세포의 3차원 공동 배양 모델

아가로스 캐스트가 들어 있는 배양 플레이트로 시작합니다. 캐스트는 여러 개의 마이크로웰이 있는 파종 챔버로 구성됩니다.

각 마이크로웰은 배양 배지에 종양 스페로이드를 포함합니다. 스페로이드는 종양 세포의 3차원 응집체입니다.

먼저 아가로스 캐스트를 둘러싼 배지를 제거합니다. 그런 다음 스페로이드의 손실을 방지하기 위해 파종 챔버의 한쪽 모서리에서 캐스트 내의 배지를 제거합니다.

종양 특이적 T 세포의 현탁액을 파종 챔버에 적하 도입하여 세포가 스페로이드를 포함하는 마이크로웰에 침전되도록 합니다.

다음으로, 아가로스 캐스트 주위에 배양 배지를 추가하고 생리학적 조건에서 플레이트를 배양하여 공동 배양을 개발합니다.

배양하는 동안 T 세포는 스페로이드를 둘러싸고 있습니다. T 세포의 하위 집합은 스페로이드에 침투하는 반면 다른 세포는 주변에 남아 3차원 공동 배양 모델을 확립합니다.

T 세포 공동 배양을 설정하려면 웰당 적절한 T 세포 배양 배지의 190마이크로리터에 적절한 수의 T 세포를 재현탁하고 12웰 플레이트를 기울여 아가로스 캐스트를 둘러싼 세포 배양 배지를 먼저 제거한 다음 파종 챔버에서 스페로이드를 제거하지 않습니다.

광학 현미경을 사용하여 스페로이드가 흡인되었는지 확인하고 P200 로드 피펫을 각 캐스트보다 약 1/2센티미터 위에 놓고 스페로이드를 제거하지 않고 T 세포를 캐스트에 조심스럽게 파종합니다. 모든 캐스트가 파종되면 플레이트를 15분 동안 세포 배양 인큐베이터에 조심스럽게 되돌린 후 태아 소 혈청이 보충된 신선한 세포 배양 배지를 각 캐스트 외부에 추가하여 또 다른 48시간 배양합니다.