0 조회수 • 3:33 분 • July 8th, 2025
결장 염증을 유발하는 항염증성 사이토카인인 인터루킨-10이 결여된 구속된 마우스로 시작합니다.
건강한 쥐에서 다양한 장내 미생물이 풍부한 대변 현탁액으로 채워진 주사기를 가져 가십시오.
그런 다음 주사기에 구강 튜브를 부착합니다.
이 튜브를 입에 삽입하여 마우스의 위쪽으로 아래로 안내합니다.
이제 대변 현탁액을 위장에 직접 투여하여 점차적으로 결장에 도달하도록 합니다.
결장에 들어가면 분변 미생물이 증식하고 집락화되어 장내 미생물을 재건합니다.
그런 다음 식민지화된 미생물은 다양한 2차 대사 산물을 방출합니다.
이러한 대사산물은 결장 상피를 복구하고 장 무결성을 회복하는 뮤신 생성을 돕습니다.
결장 상피 내에서 분변 미생물과 그 대사 산물은 면역 세포와 상호 작용합니다.
이러한 상호 작용은 면역 세포가 항염증 사이토카인을 방출하여 인터루킨-10 결핍 마우스의 결장 염증을 감소시킵니다.
생리 식염수에 10% 글리세롤 용액을 첨가하여 멸균 용액을 준비합니다. 배설물 알갱이의 각 그램에 대해 이 용액 10밀리리터를 원추형 튜브에 추가합니다. 이 혼합물을 30초 동안 저속으로 3회 균질화하고 훈제 후드 내부의 벤치탑 균질화기를 사용하여 대변을 재현탁합니다. 두 겹의 멸균 면 거즈를 통해 대변 현탁액을 걸러냅니다. 여과액을 냉장고에 최대 6시간 동안 임시로 보관하거나 멸균 극저온 바이알에 포장하여 영하 80도 냉동실에 보관하십시오.
표준 절차에 따라 균질화기 또는 블렌더를 철저히 청소하십시오. 냉동 샘플을 사용하는 경우 얼음 위에서 냉동 대변 현탁액을 해동하십시오. 해동된 대변 현탁액을 소용돌이로 혼합합니다. 신선하거나 해동된 대변 현탁액을 1밀리리터 주사기에 옮깁니다. 마우스의 무게를 측정하고 올바른 위관 바늘 크기와 최대 투여량을 선택하십시오.
마우스의 코 끝에서 흉골 바닥까지의 길이를 측정하여 위관 바늘을 테스트합니다. 식염수 또는 대변 현탁액에 10% 글리세롤을 주사기에 채우고 주사기와 바늘 내부의 기포를 제거합니다. 마우스 케이지 하나를 생물 안전 캐비닛에 놓고 플라스틱 케이지 덮개를 제거한 다음 금속 랙을 제자리에 둡니다.
한 손으로 금속 선반을 엽니다. 쥐 한 마리의 꼬리를 잡고 금속 선반에 올려 놓습니다. 한 손으로 쥐의 꼬리를 잡고, 다른 손의 엄지와 중지를 사용하여 어깨 너머의 피부를 잡아 동물을 제지합니다. 동물의 머리를 부드럽게 뒤로 뻗고 한 손으로 머리를 제자리에 고정합니다. 위관 바늘을 입 안쪽의 혀 위에 놓습니다.
바늘이 식도에 도달할 때까지 상입천장을 따라 부드럽게 전진합니다. 한 번에 바늘을 부드럽게 통과시킵니다. 바늘이 제대로 배치되고 확인되면 바늘에 부착된 주사기를 밀어 천천히 재료를 투여합니다. 투여 후 바늘을 부드럽게 당겨 빼냅니다. 마우스에 표시를 하고 홈 케이지로 돌려보냅니다. 호흡 곤란이나 고통의 징후를 찾아 5-10분 동안 동물을 모니터링하십시오. 분변 미생물군 이식 후 12시간에서 24시간 사이에 마우스를 다시 모니터링합니다.