분자의 지연된 버스트 방출을 위한 새로운 전달 플랫폼을 생성하는 기술

JoVE Encyclopedia of Experiments

면역학

0 조회수 • 3:50 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

분배 튜브가 있는 주사기를 펌프에 부착합니다. 주사기에는 독특한 폴리머 혼합물인 광개시제-폴리에스테르 혼합물이 포함되어 있습니다.

블렌드를 셀룰로오스 기반 폴리머의 점성 수용액에 분배합니다. 이것은 상 분리를 유도하여 폴리버블이라고 하는 고분자 구형 구조를 형성합니다.

자외선 조사는 광개시제를 활성화하여 폴리머가 가교를 촉발하고 내부 코어를 둘러싼 껍질을 형성합니다.

다음으로, 바늘을 삽입하여 형광단 태그가 부착된 분자의 점성 용액을 폴리버블 코어에 주입합니다.

폴리버블 무결성을 복원하기 위해 다시 조사하십시오. 동결 건조하여 과도한 물을 제거하고 폴리버블을 회수합니다.

방출 프로파일을 확인하려면 폴리버블을 완충액에 배양합니다.

수성상과 접촉하면 폴리머 껍질이 침식되어 기공이 형성됩니다. 시간이 지남에 따라 이러한 기공은 서로 연결되어 표지된 분자를 방출합니다.

정기적으로 상청액을 수집하고 형광 강도를 정량화합니다.

확장된 배양 후 형광의 갑작스러운 증가는 지연된 버스트 방출을 확인합니다.

폴리버블을 제작하려면 먼저 1밀리리터 이송 피펫을 사용하여 800마이크로리터의 10% CMC를 0.92밀리리터 유리 바이알에 추가합니다. PCLTA를 합성하려면 14킬로달톤 PCL 밀리리터당 1,000g을 200마이크로리터의 DCM에 혼합합니다. PLGADA를 합성하려면 5킬로달톤 PLGADA의 밀리리터당 1,000g을 200마이크로리터의 클로로포름에 혼합합니다.

광개시제와 관심 폴리머 혼합물을 0.005:1 비율로 혼합하고 생성된 용액 200마이크로리터를 내경 0.016인치의 디스펜싱 스테인리스 스틸 튜브에 연결된 주사기 펌프에 장착된 1밀리리터 유리 주사기에 넣습니다.

마이크로 모터를 사용하여 폴리머 튜브의 전진 및 후진 운동을 제어하고, 유리 바이알의 10% CMC에 폴리머를 주입하여 폴리버블을 형성하고 254나노미터 파장의 자외선 하에서 폴리버블을 평방센티미터당 2와트로 60초 동안 경화시킵니다. 그런 다음 폴리버블을 액체 질소에서 30초 동안 급속 냉동하고 캐리어를 0.01밀리바 진공 및 섭씨 영하 85도에서 밤새 동결건조합니다.

폴리버블 내에서 관심 화물을 중심에 맞추려면 화물을 5% CMC 및 회전자와 밤새 혼합하여 화물의 점도를 높인 후 2마이크로리터의 화물 혼합물을 폴리 버블에 수동으로 주입합니다. 모든 화물이 주입되면 방금 시연한 대로 주입된 폴리버블을 회수, 급속 동결 및 동결건조합니다.

다음날 아침 집게를 사용하여 건조된 CMC에서 폴리버블을 분리하고 탈이온수로 폴리버블을 세척하여 잔류 CMC를 제거합니다. 그런 다음 폴리버블을 반으로 자르고 공초점 현미경으로 반쪽을 이미지화하여 화물이 중앙에 있는지 확인합니다.

소분자 화물 방출의 경우, 적절한 배양 길이를 위해 섭씨 37도에서 중심에 있는 아크리플라빈 및 400마이크로리터의 PBS와 함께 폴리버블을 배양합니다. 각 실험 시점에서 상청액을 수집하고 400마이크로리터의 신선한 PBS를 바이알에 추가합니다. 그런 다음 플레이트 리더를 사용하여 수집된 상청액의 형광 강도를 정량화합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026