제브라피시 배아에서 녹농균 감염에 대한 파지 요법

녹

농균 감염에 취약한 마취된 탈융모체 낭포성 섬유증 제브라피쉬 배아를 취하십시오.

형광 단백질 발현 녹농균을 주요 혈관인 퀴비에관에 주입합니다.

주입된 배아를 배지 및 색소 침착 차단제가 있는 플레이트로 옮겨 배아 색소 침착을 억제하고 박테리아를 시각화합니다. 인큐베이트.

주입된 박테리아는 순환계를 통해 이동하여 장기를 침범합니다.

이에 대한 반응으로 숙주 면역 체계가 활성화되어 전염증 매개체를 방출하고 면역 세포를 모집합니다.

배양 후, 녹농균에 대한 독성 파지 칵테일을 퀴비에관에 주입하고 배아를 배지와 색소 침착 차단제가 들어 있는 플레이트로 옮깁니다.

인큐베이트. 파지는 박테리아를 감염시키고 숙주 기계를 사용하여 새로운 파지 입자를 생성합니다.

박테리아는 용해되어 인접한 박테리아를 감염시키는 파지를 방출하여 전염증 반응을 감소시킵니다.

형광 현미경을 사용하여 시간이 지남에 따라 제브라피쉬 배아에서 감소된 박테리아 형광을 관찰하여 녹농균에 대한 파지 효과를 나타냅니다.

수정 후 26시간에, 약 5마이크로리터의 녹농균 접종물을 미세주입 바늘에 넣고 바늘을 Cuvier 덕트의 시작점에 등쪽으로 삽입하면 덕트가 난황낭 위로 퍼지기 시작합니다. 1-3나노리터의 PAO1 접종물을 배아에 주입하여 부피가 관 내에서 직접 팽창하고 순환계로 들어가

도록 합니다.

주입 후, 배아를 섭씨 28도에서 30분 또는 3시간 동안 배양하기 위해 페닐티오우레아가 보충된 신선한 E3 배지를 포함하는 두 개의 새로운 페트리 접시 중 하나로 옮깁니다. 그런 다음 약 5마이크로리터의 파지 칵테일이 미세주입 바늘에 로드되고 바늘을 마이크로인젝터에 고정합니다. 그런 다음 이전에 박테리아를 주입한 각 배아의 퀴비에 덕트에 1 내지 3나노리터의 파지 칵테일을 주입하고 섭씨 28도에서 페닐티오우레아가 보충된 신선한 E3 배지를 포함하는 두 개의 새로운 페트리 접시 중 하나에 배아를 넣습니다.