HIV에 대한 공학적 면역을 가진 인간화 마우스 모델 구축

마취된 중증 면역 저하 수용자 마우스를 준비합니다.

절개를 하여 신장을 노출시키고 신장 캡슐에 구멍을 만듭니다.

젤라틴 단백질 혼합물에 현탁된 인간 태아 흉선 조직과 태아 간 유래 세포가 들어 있는 임플란트 바늘을 가져갑니다.

세포에는 HIV를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 조작된 조혈모세포(HSC)가 포함됩니다.

캡슐 아래에 세포 현탁액과 흉선 조직을 이식한 다음 절개 부위를 닫습니다.

다음으로, CAR 발현 조혈모세포를 후궤와 주입하고 마우스가 회복되도록 합니다.

신장에서 젤라틴 단백질 혼합물은 기질로 중합되어 이식 부위에 조혈모세포를 유지합니다.

기질 조혈모세포는 흉선으로 이동하여 기능성 인간 T 세포로 분화합니다.

한편, 후궤 주입된 조혈모세포는 골수에 도달하여 기능성 인간 B 세포, 단핵구 및 NK 세포로 분화합니다.

HIV에 대한 인간 면역 체계를 가진 마우스 모델이 이제 준비되었습니다.

플라스크에서 흉선 조각과 배지를 60mm 접시에 붓습니다. 일부 용적식 피펫 팁을 얼음 위의 열린 1.5밀리리터 멸균 스크류 캡 튜브에 넣어 식힙니다. 또한 세포 펠릿과 Matrigel과 같은 젤라틴 단백질 혼합물을 얼음 위에 놓습니다.

승인된 동물 프로토콜에 따라 주사 가능한 마취제로 수혜자 마우스를 마취합니다. 발을 쥐어짜서 마우스의 마취 수준을 확인합니다. 꼬집음에 대한 반응이 없다는 것은 마취의 수술면을 나타냅니다.

각 마우스의 왼쪽을 엉덩이에서 어깨까지, 등 중앙과 배 사이를 면도합니다. 피하 주사로 희석된 카프로펜 kg당 6mg을 동물의 어깨나 사타구니 삼각형에 주입합니다. 투관침의 캐뉼라를 60mm 접시에 PBS로 세척합니다. 한 쌍의 뭉툭하고 구부러진 집게를 사용하여 캐뉼라 입구 바로 안쪽에 60mm 접시에서 흉선 조각을 놓은 다음 투관침을 뒤로 당겨 조직을 캐뉼라로 흡인합니다.

다음으로, 용적식 피펫과 냉각된 팁을 사용하여 5마이크로리터의 차가운 젤라틴 단백질 혼합물을 세포 펠릿이 있는 튜브에 넣고 부드럽게 저어주어 세포 현탁액을 생성합니다. 세포 현탁액을 캐뉼라 입구에 피펫팅하고 천천히 투관침을 뒤로 당겨 바늘을 로드합니다.

마우스의 면도된 부위를 포비돈-요오드로 면봉으로 닦은 다음 이소프로판올을 세 번 닦습니다. 비장의 위치를 나타내는 피부 아래의 가장 어두운 부분을 결정하십시오. 신장은 비장의 등쪽으로 약 5mm입니다.

발 꼬집기에 대한 반응이 없어 적절한 수준의 마취를 확보한 후 구부러진 집게를 사용하여 피부를 들어 올리고 수술용 가위를 사용하여 비장과 평행한 피부를 15mm 절개합니다. 그런 다음 아래 복막층에도 비슷한 컷을 만듭니다.

남성의 경우 신장이 쉽게 보이기 때문에 복부를 누르기만 하면 돌출됩니다. 지혈제나 한 쌍의 구부러진 무딘 겸자로 신장을 지지합니다. 여성의 경우 난소가 신장을 쉽게 적출하지 못하게 막는 경향이 있습니다. 지혈제를 사용하여 난소를 집어 들고 조심스럽게 신장을 노출시킵니다.

바늘 끝이 있는 집게를 사용하여 신장 캡슐의 뒤쪽 끝에 있는 작은 구멍을 뽑습니다. 캐뉼라의 입구가 신장 캡슐로 완전히 덮일 때까지 투관침을 이 구멍과 신장을 따라 밀어 넣습니다. 신장 캡슐 아래의 조직을 부드럽게 밀어내고 투관침을 다시 당겨 빼냅니다. 구부러진 집게를 사용하여 흉선 조각이 바늘과 함께 나오지 않도록 합니다.

그런 다음 집게로 복막을 들어 올리고 지혈제를 부드럽게 사용하여 신장을 제자리로 밀어 넣습니다. 복막에 수술용 봉합사로 이중 매듭 스티치 하나를 묶습니다. 또한 두 개의 자동 클립 감긴 클립을 배치하여 피부를 닫습니다.

이제 형질도입된 CD34 양성 세포를 혼합하고 100마이크로리터 부피의 0.5 x 10⁶ 세포를 인슐린 주사기에 흡인합니다. 후안와 정맥 주사를 통해 이 세포를 마우스에 주입합니다.

주사 후 눈 윤활제를 양쪽 눈에 소량 떨어뜨리고 마우스를 케이지에 옆으로 눕힙니다. 모든 쥐를 이식한 후 동물이 의식을 회복하고 걸을 수 있는지 확인한 후 주거실로 돌려보냅니다.