Bone Marrow Stem Cells에서 원형질막 소포 생성

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골수 줄기 세포 배양으로 시작하십시오.

트립신-EDTA 완충액을 도입하여 세포를 분리하고 세포 덩어리를 분해하여 단일 세포 현탁액을 형성합니다.

원심분리한 다음 상층액을 제거합니다. 펠릿을 신선한 배지로 재현탁합니다.

현탁액을 주사기로 옮기고 멤브레인 필터 장치에 연결합니다.

플런저를 누르고 여과액 함유 매체를 버립니다.

필터를 분리합니다. 주사기에 신선한 배지를 채웁니다. 필터를 다시 연결하고 플런저를 빠르게 밉니다.

액체의 압력은 셀을 필터 기공 쪽으로 밀어냅니다.

이것은 구형 원형질막 소포 또는 PMV를 생성합니다.

이 소포에는 막으로 둘러싸인 세포 성분과 소기관이 포함되어 있습니다.

투명 구형 소포를 관찰하기 위해 역위상차 현미경으로 여과액을 검사합니다.

소포의 치수는 필터 멤브레인의 기공 크기와 일치하여 PMV의 생성을 확인합니다.

PMV를 생성하기 위해, 먼저 37°C 및 5% 이산화탄소의 가습 인큐베이터에서 6웰 플레이트의 한 웰에서 완전한 DMEM 배양 배지에서 마우스 PMSC를 배양합니다. 세포가 90% 융합도에 도달하면 0.5밀리리터의 칼슘 프리 PBS로 웰을 헹구고 0.5밀리리터의 0.25% 트립신-EDTA로 세포를 분리합니다.

섭씨 37도에서 3분 후 손바닥으로 플레이트를 몇 번 두드려 세포 해리를 촉진하고 배양 배지 1밀리리터로 소화를 멈춥니다. 원심분리를 위해 세포를 5밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 펠릿을 4밀리리터의 신선한 배양 배지에 재현탁합니다. 그런 다음 새로운 6웰 플레이트의 두 웰 사이에 세포를 나누고 플레이트를 24시간 동안 세포 배양 인큐베이터로 되돌립니다.

다음날, 방금 시연한 바와 같이 트립신 분해를 통해 한 웰에서 세포를 수확하고, 원심분리에 의해 수집한 후 펠릿을 0.5밀리리터의 신선한 배양 배지에 재현탁합니다. 세포를 1밀리리터 인슐린 주사기에 넣고 주사기를 필터 장치에 부착합니다. 플런저를 빠르게 눌러 필터를 통해 셀을 압착하고 압출된 배지를 버립니다. 그런 다음 방금 설명한 대로 필터를 통해 0.5밀리리터의 여분의 배양 배지를 로드하고 분배하여 두 번째 압출에서 배지를 수집합니다.

수집된 배지 150마이크로리터를 35밀리리터 유리 바닥 접시에 시드하고 소포가 약 10분 동안 가라앉도록 합니다. 그런 다음 20배 대물 렌즈를 사용하여 CCD 카메라가 장착된 역위상차 현미경에서 PMV의 존재를 확인합니다.

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Last updated: 18 July 2026