형질전환된 효모 세포를 마우스 장 면역 체계로 경구 전달

우라실 핵염기를 생성할 수 없는 유전적으로 형질전환된 영양 영양 효모의 현탁액이 들어 있는 구강 튜브로 시작합니다.

구강 튜브를 구속된 쥐의 입에 삽입하고 위까지 안내합니다.

효모 현탁액을 위장에 직접 투여하여 결국 소장에 도달할 수 있도록 합니다.

소장에는 상피 세포가 포함되어 있으며 그 밑에는 면역 세포가 풍부한 파이어 반

이 있습니다.

파이어 패치 근처의 특수한 장 상피 세포인 마이크로폴드 세포는 효모 세포를 삼켜 소포로 내재화합니다.

이 소포는 세포를 가로질러 이동하여 효모 세포를 밑에 있는 파이어 패치로 방출합니다.

희

생된 마우스 장에서 Peyer's 패치를 분리하고 균일한 세포 현탁액을 얻습니다.

이 세포 현탁액을 우라실을 함유한 효모 선택적 배지에서 배양합니다.

영양 영양 효모는 우라실을 활용하고 증식하여 콜로니를 형성하여 형질전환된 효모 세포가 마우스 장 면역 체계로 전달되는 것을 확인합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 효모 배양을 준비한 후 혈구계를 사용하여 세포 농도를 결정하고 밀리리터당 10 내지 9번째 세포로 조정합니다. 3분 동안 2,500배 g에서 원심분리하여 세포를 펠릿화합니다. 그런 다음 상청액을 붓고 적절한 양의 멸균수를 추가하고 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 세포를 재현탁합니다.

적절한 게이지 위관 바늘을 1밀리리터 멸균 주사기에 고정하고 효모 샘플을 로드하여 기포를 제거합니다. 추가 주사기에 멸균수를 넣어 대조군 마우스를 위관합니다. 주로 사용하지 않는 손을 사용하여 개브할 마우스를 집어 들고 검지와 엄지손가락으로 목 주위의 피부를 단단히 잡습니다. 꼬리를 작은 손가락 아래에 집어넣습니다. 그립이 단단히 고정되어 있고 마우스가 머리를 움직이지 못하도록 합니다.

다음으로, 입천장과 목구멍 뒤쪽을 따라 바늘의 각도를 조절하여 위관 바늘을 마우스 식도에 부드럽게 삽입하고 중앙에서 약간 왼쪽으로 유지합니다. 마우스가 바늘 전구를 삼킬 때까지 기다리십시오. 저항이 느껴지거나 마우스가 헐떡거리면 바늘을 부드럽게 제거하고 식도를 다시 찾으십시오.

마우스가 위관 바늘의 전구를 삼킨 후 주사기 플런저를 부드럽게 눌러 효모를 마우스 위장에 직접 투여합니다. 마우스 위와 식도에서 위관 바늘을 부드럽게 제거하고 마우스를 케이지로 되돌립니다. 마우스가 정상적으로 호흡하고 움직이는지 확인하여 위관이 제대로 수행되었는지 확인하십시오.

텍스트 프로토콜에 따라 마우스를 희생한 후 복부가 완전히 노출된 상태로 배치하고 70% 에탄올을 사용하여 복부에 분사합니다. 가위로 털과 피부를 가로로 절개합니다. 그런 다음 절개 부위를 수동으로 들어 올려 복부 장기를 덮고 있는 얇은 장막 내벽인 복막을 더 노출시킵니다. 복막을 부드럽게 들어 올리고 가로 절개를 하여 장을 노출시킵니다.

그런 다음 뭉툭한 집게를 사용하여 소장을 장간막 동맥, 지방 및 기타 조직에서 조심스럽게 떼어냅니다. 마우스 복부의 왼쪽 상단 사분면에 있는 위에서 대장 시작 부분에 있는 장 조직의 큰 주머니인 맹장까지 소장을 노출시킵니다.

다음으로, 소장을 따라 불투명 조직의 대략 1-2mm 원형 패치를 찾아 파이어 패치를 분리합니다. 그런 다음 곡선 해부 가위를 사용하여 Peyer 패치의 돔을 잘라내고 주변 조직이 수집되지 않도록 여백을 남깁니다.

해부된 Peyer's 패치를 완전한 IMDM으로 옮깁니다. 그런 다음 Peyer 패치가 부유된 용액을 40마이크로미터 세포 여과기에 붓습니다. 완전한 IMDM으로 파이어 패치를 세척한 후 1밀리리터 주사기의 플런저를 사용하여 조직을 부드럽게 분해하고 세포를 50밀리리터 튜브에 모으십시오. 변형된 세포를 1,800RPM에서 7분 동안 펠릿화합니다. 그런 다음 텍스트 프로토콜에 따라 셀을 분석합니다

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