0 조회수 • 3:12 분 • July 8th, 2025
박테리아 응집을 방지하기 위해 비이온성 계면활성제로 처리된 마이코박테리움 보비스 BCG 현탁액으로 시작합니다.
다음으로, 비오티닐화 시약을 첨가하고 배양합니다.
기능성 링커에 복합화된 비오틴의 복합체인 이 비오티닐화 시약은 비오틴 분자를 박테리아 표면 단백질에 결합하여 박테리아를 표지하는 것을 촉진합니다.
배양 후, 비오틴 표지 박테리아 현탁액을 원심분리하여 반응되지 않은 비오티닐화 시약을 제거합니다.
박테리아를 완충액에 재현탁합니다. 단량체 아비딘에 융합된 표적 항원 도메인을 포함하는 재조합 단백질인 아비딘-융합 단백질의 용액을 추가합니다.
배양하는 동안 아비딘은 비오틴에 결합하여 표적 항원으로 박테리아 표면 변형을 촉진합니다.
현탁액을 원심분리하여 결합되지 않은 융합 단백질을 제거합니다.
항원으로 코팅된 박테리아를 비이온성 계면활성제를 함유한 완충액에 재현탁합니다. 박테리아의 항원 코팅은 면역 반응을 유발하는 특성을 향상시킬 수 있습니다.
BCG는 레벨 II 병원체이므로 개인 보호 장비를 사용하여 생물 안전 캐비닛에서 작업하십시오.
BCG 세포의 표면을 비오틴화하려면 먼저 셰이커 플랫폼에서 세포를 적절한 밀도로 성장시킵니다. 약 10억 개의 세포를 수집하고 500마이크로리터의 얼음처럼 차가운 내독소가 없는 PBST를 사용하여 세 번 세척합니다. 그런 다음 세포를 회전시키고 멸균 내독소가 없는 PBS에 현탁합니다. 다음으로, 멸균 여과수에 신선한 10밀리몰 Sulfo-NHS SS 비오틴을 준비합니다. 그런 다음 0.5밀리몰의 Sulfo-NHS SS 비오틴이 함유된 국물 1밀리리터에 박테리아를 배양합니다. 실온에서 30분 동안 배양합니다.
다음으로, 이제 표지된 박테리아를 얼음처럼 차가운 PBST 500마이크로리터로 세 번 세척하여 반응되지 않은 시약을 제거합니다. 그런 다음 펠릿을 PBST 1밀리리터에 재현탁합니다.
5억 개의 비오티닐화 BCG를 아비딘 융합 단백질과 혼합하여 밀리리터당 10마이크로그램의 단백질을 최종 농도에 이룹니다. 이 반응을 셰이커에서 실온에서 한 시간 동안 그대로 두십시오. 다음으로, 500마이크로리터의 얼음처럼 차가운 PBST로 박테리아를 세 번 세척합니다.