지카 바이러스 성장의 강력한 억제제로서 인터페론을 스크리닝하기 위한 체외 분석

바이러스에 민감한 상피 세포 단층이 포함된 웰을 취하십시오.

테스트 웰에 테스트 인터페론의 연속 희석액을 추가합니다. 컨트롤 우물에는 인터페론이 부족합니다.

테스트 웰에서 인터페론은 세포 수용체에 결합하여 항바이러스 단백질 발현을 위한 신호 전달 캐스케이드를 유발합니다.

배양 후 모든 우물에 지카 바이러스를 추가합니다.

지카 바이러스는 숙주 세포 수용체 및 엔도사이토시스와 상호 작용합니다.

이제 흡착되지 않은 바이러스를 제거하십시오. 대조군 웰에 배지를 추가하고 테스트 웰에 추가 인터페론이 포함된 배지를 추가합니다.

인큐베이트. 대조군 우물에서 내재화된 바이러스는 숙주 세포 기계를 사용하여 새로운 바이러스 입자를 형성합니다.

감염된 세포는 용해되어 다른 세포를 감염시키고 용해하는 바이러스 입자를 방출하여 세포 단층에 투명한 용해 영역 또는 플라크를 형성합니다.

인터페론 처리된 세포에서 항바이러스 단백질은 바이러스 복제 및 세포 용해를 억제하여 플라크 형성을 방지합니다.

위상차 현미경을 사용하여 우물에 있는 바이러스 플라크를 계산합니다.

인터페론 처리 우물에 있는 플라크 수가 적다는 것은 지카 바이러스에 대한 인터페론의 항바이러스 활성을 나타냅니다.

나이브 Vero 세포로 12웰 플레이트를 시드한 후 6시간 후, 생물학적 복제물에 표시된 농도로 관심 사이토카인을 추가합니다. 처리 후 12시간, 지카 바이러스 감염을 수행하고 감염이 없는 음성 대조군 웰을 포함합니다. 감염 후 4시간 후, 바이러스 접종물을 사이토카인 처리 배지로 교체한 다음 세포를 섭씨 37도에서 추가로 44시간 동안 배양합니다. 감염 후 48시간에 위상차 현미경을 사용하여 바이러스 플라크를 계수하고 40배 배율로 감염된 세포의 대표적인 이미지를 획득합니다.