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면역학
0 조회수 • 3:16 분 • July 8th, 2025
수지상 세포 또는 DC의 현탁액이 포함된 멀티웰 플레이트로 시작합니다.
고혈압 상태를 모방하려면 고농도의 나트륨 이온이 포함된 배양 배지를 추가하고 배양합니다.
배양하는 동안 나트륨 이온이 세포에 들어가 세포내 나트륨 농도를 증가시킵니다.
이것은 세포내 나트륨 이온과 세포외 칼슘 이온의 교환을 촉발합니다.
내부 칼슘 수치가 증가하면 세포 단백질에 결합하는 반응성 알데히드의 생성을 촉진하는 경로가 활성화됩니다. 이것은 표면에 이러한 변형된 단백질을 표시하는 DC를 활성화합니다.
배양 후, 튜브에 세포를 모아 원심분리합니다.
상청액을 제거합니다. 세포를 재현탁하기 위해 새로운 완충액을 추가합니다.
세포 현탁액을 주사기에 끌어당깁니다.
마취된 마우스를 가져다가 안와굴 뒤의 영역인 안와후방에 세포 현탁액을 주입합니다.
활성화된 면역 세포를 주입하는 이 과정을 입양 세포 이식이라고 합니다.
900마이크로리터의 DC 서스펜션을 24웰 평평한 바닥 팔콘 플레이트에 피펫팅합니다. 100마이크로리터의 고염 DC 배양 배지를 각 웰에 첨가하여 최종 나트륨 농도가 190밀리몰이 되도록 합니다. 플레이트에 라벨을 붙이고 섭씨 37도의 가습된 이산화탄소 인큐베이터에 48시간 동안 넣습니다.
48시간 후 인큐베이터에서 플레이트를 제거합니다. 단일 웰에서 세포 배양 배지를 위아래로 닦아내어 CD11c 양성 DC를 재현탁합니다. 모든 현탁액을 해당 표지된 1.6밀리리터 튜브로 옮깁니다. 도금된 각 개별 웰에 대해 이 작업을 반복합니다.
모든 튜브를 300배 g과 섭씨 4도에서 10분 동안 원심분리합니다. 상청액을 흡인하고 DC 펠릿을 100마이크로리터의 멸균 DPBS로 재현탁합니다. 그런 다음 튜브 중 하나에서 DC 용액을 27게이지 반인치 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기로 끌어당깁니다.
나이브한 수컷, 10주령, C57 블랙 6 마우스를 2% 이소플루란 아래에 놓아 안정적인 수술 평면을 얻습니다. 페달 반사가 없는 마취 수준을 확인하십시오. 안정적인 수술 평면이 달성되면 약 30도 각도로 바늘을 안와 후 공간에 천천히 조심스럽게 삽입합니다.
천천히 부드럽게 CD11c 양성 DC 현탁액을 주입합니다. 주사가 완료되면 눈이 손상되지 않도록 안와 후방의 바늘을 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 노즈콘에서 마우스를 제거하고 마취에서 회복하는 동안 약 30분 동안 모니터링합니다.