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신경과학
0 조회수 • 3:24 분 • July 8th, 2025
냉동 보존된 배아 뉴런이 포함된 냉동 세포로 시작하여 제어된 해동을 위해 가열 블록에 넣습니다.
다음으로, 해동된 뉴런을 튜브로 옮기고 신경기저 배지로 적하 희석하여 삼투압의 균형을 맞추고 세포 용해를 방지합니다.
이것은 균일하게 분산된 뉴런을 가진 균질한 현탁액을 생성합니다.
희석된 신경 현탁액을 영양분과 항생제가 풍부한 신경기저 배지가 들어 있는 폴리-L-라이신 코팅 멀티웰 플레이트에 시드합니다.
양전하를 띤 폴리-L-라이신이 정전기 상호 작용을 통해 뉴런과 상호 작용하여 접착을 촉진하도록 배양합니다.
우물에 신선한 신경기저 배지를 공급하십시오.
배지 증발을 방지하기 위해 습한 조건에서 동일한 배지에서 세포를 배양합니다.
배아 뉴런은 영양분을 활용하고 뉴런 과정을 발달시키고 일차 뉴런을 형성하여 성장합니다.
신경기저 배지는 넓은 간격으로 보이는 1차 뉴런을 유지하여 뉴런 연결이 있는 저밀도 1차 배양을 생성합니다.
웰당 100마이크로리터의 폴리-L-라이신으로 96웰 마이크로플레이트를 코팅하는 것으로 시작합니다. 다음으로, 플레이트를 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 배양이 끝나면 폴리-L-라이신 용액을 제거합니다. 플레이트를 멸균수로 두 번 세척하고 보충제가 없는 신선한 배양 배지로 한 번 세척합니다. 접시를 꺼내 말리십시오. 마른 접시는 감싸서 섭씨 4도에서 최대 1개월 동안 보관할 수 있습니다.
세포 파종을 시작하려면 코팅된 플레이트의 각 웰에 50마이크로리터의 배양 배지를 추가합니다. 주변 웰에 200마이크로리터의 멸균수를 채우고 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소와 함께 1시간 동안 배양합니다.
액체 질소 탱크에서 뉴런 냉동 조종을 제거하고 섭씨 37도 열 블록에 넣어 내용물을 부분적으로 해동합니다. 와이드 보어 팁이 있는 1밀리리터 피펫을 사용하여 바이알의 내용물을 멸균 50밀리리터 튜브로 천천히 옮깁니다. 빈 극저온 배지를 실온 배양 배지 1밀리리터로 헹굽니다. 헹굼 용액을 세포 현탁액이 들어 있는 50밀리리터 튜브로 옮깁니다.
다음으로, 실온 배양 배지 9밀리리터를 50밀리리터 튜브에 적가하여 부피를 11밀리리터로 만듭니다. 혈구측정기를 사용하여 세포를 계수한 후 세포 현탁액을 저장소로 옮깁니다. 이제 와이드 보어 팁이 있는 다중 채널 피펫을 사용하여 웰당 1.0 x 104 세포의 최종 카운트로 세포 현탁액을 코팅된 96웰 플레이트에 분배합니다.
뉴런을 이산화탄소 5% 이하의 섭씨 37도에서 1-2시간 동안 배양합니다. 그런 다음 배양 배지를 100마이크로리터의 예열된 배양 배지로 교체하고 동일한 조건에서 다시 배양합니다.