인간 뇌 오가노이드를 생성하는 체외 방법

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신경과학

0 조회수 • 3:33 분 • July 8th, 2025

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신경상피 전구 세포의 자유 부유 클러스터인 신경구 배양으로 시작하십시오.

이 신경구를 매립 시트로 옮깁니다.

미디어를 제거합니다. 단백질과 성장 인자를 포함하는 세포외막 기질을 각 신경구에 한 방울씩 추가합니다.

매트릭스가 응고될 때까지 배양하고 그 안에 신경구를 내장합니다.

이제 신경구 배지를 사용하여 매트릭스 포매 신경구를 신경구 배지가 포함된 배양 플레이트로 옮깁니다.

인큐베이트. 세포외막 기질과 그 성분은 신경상피 전구 세포가 증식하고 액체로 채워진 내강을 형성하는 신경상피 세포로의 분화를 촉진합니다.

배양 후, 신경구를 미리 예열된 뇌 오가노이드 배지가 들어 있는 스피너 플라스크로 옮깁니다. 산소와 영양분 확산을 강화하여 세포 성장을 촉진하기 위해 교반하면서 배양합니다.

배지의 성장 인자와 소분자 억제제는 신경 분화를 촉진하고 특정 뇌 영역의 세포로 발달하여 성숙한 뇌 오가노이드를 형성합니다.

이 절차를 시작하려면 이전에 멸균 가위로 자른 200mm 팁을 사용하여 200마이크로리터 마이크로피펫으로 신경구를 수집합니다. 다음으로, 신경구를 100mm 접시의 파라핀 필름 위에 서로 약 5mm 떨어진 곳에 놓고 남은 배지를 최대한 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 각 단일 신경구에 EHS 매트릭스 한 방울을 추가합니다.

EHS 매트릭스 방울을 신경구와 함께 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 신경구 배지로 세척하여 파라핀 필름에서 신경구를 조심스럽게 씻어냅니다. 그 후, 다음 4일 동안 신경구를 배양하고 2일째에 신선한 신경구 배지 2밀리리터를 추가합니다.

이 절차에서는 측면 암을 통해 각 스피너 플라스크에 100밀리리터의 뇌 오가노이드 배지를 추가하고 인큐베이터에서 배지를 섭씨 37도에서 최소 20분 동안 예열합니다. 그런 다음 신경구가 모두 분리되어 있는지 확인하십시오. EHS 매트릭스를 통해 두 개 이상이 연결된 경우 연결 매트릭스를 메스로 절단하여 분리합니다.

교반 프로그램을 25RPM으로 설정합니다. EHS 매트릭스 포매드 신경구를 100밀리리터의 오가노이드 배지가 들어 있는 스피너 플라스크로 조심스럽게 옮깁니다. 그런 다음 스피너 플라스크를 인큐베이터의 자기 교반 플랫폼에 섭씨 37도에서 14일 동안 놓습니다. 이것은 오가노이드 배양의 0일입니다. 배지의 절반을 제거하고 같은 양의 신선한 배지를 추가하여 일주일에 한 번 배지를 교체하십시오.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026