JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 4:51 분 • July 8th, 2025
마우스 피질을 작은 조각으로 자르고 완충된 소금 용액이 들어 있는 차가운 해부 배지로 옮깁니다.
소화 효소를 첨가하여 세포외 기질을 해리시킵니다.
잔류 효소를 제거하려면 차가운 해부 배지로 세척하십시오.
이 배지를 성상세포 농축 배지로 교체하십시오.
다음으로 피펫을 사용하여 조직 조각을 해리합니다.
현탁액을 스트레이너에 통과시켜 해리되지 않은 조직을 제거하고 단일 세포를 얻습니다.
세포를 양전하를 띤 폴리머 코팅 플레이트로 옮깁니다. 흔들면서 배양합니다.
성상세포는 단단히 부착되는 반면, 느슨하게 결합된 뉴런, 미세아교세포, 희소돌기아교세포는 분리됩니다.
농축 배지는 성숙한 성상세포를 분열하는 다각형 성상세포로 전환합니다.
분리된 세포를 제거하고 인산염 완충액으로 성상세포를 세척합니다.
소화 효소를 첨가하여 성상세포를 분리합니다.
효소 활성을 멈추기 위해 혈청이 함유된 배지를 첨가하십시오. 성상세포를 튜브에 모아 원심분리합니다.
상청액을 버리십시오. 세포를 성상세포 성숙 배지에 재현탁시켜 전형적인 별 모양의 성숙한 성상세포 구조를 촉진합니다.
성상세포를 생성하는 데 사용할 피질 조직을 1입방밀리미터 이하의 조각으로 자릅니다. 모든 조직 조각이 수집되면 튜브 바닥에 가라앉을 때까지 기다립니다. 그런 다음 가능한 한 많은 배지를 흡인합니다. 그런 다음 0.05% 트립신 EDTA 2-3밀리리터를 첨가하고 샘플을 섭씨 37도 수조에서 20분 동안 배양합니다.
그런 다음 트립신 EDTA를 조심스럽게 흡인하여 튜브 바닥에 최소한의 액체에 조직 조각을 남겨 둡니다. 다음으로, 예냉된 해부 배지 5밀리리터를 첨가하여 남은 트립신 EDTA를 씻어내고 상부 튜브 측면에 피펫을 넣어 조직 조각을 혼합합니다. 그런 다음 해부 배지를 흡인하고 조직 조각을 가능한 한 적은 액체에 남겨 둡니다.
예냉된 해부 배지로 이 세척 단계를 두 번 반복합니다. 최종 세척 단계 후, 실온 DMEM PLUS 1밀리리터를 넣고 기포를 일으키지 않고 위아래로 피펫팅하여 조직을 적정합니다.
성상세포는 pH에 매우 민감하므로 용액의 pH가 변할 수 있으므로 기포 생성을 피하는 것이 중요합니다.
그런 다음 100밀리리터 튜브 입구에 50미크론 셀 스트레이너를 놓고 4.5밀리리터의 예냉된 DMEM PLUS로 필터를 미리 적십니다. 해리된 조직 현탁액 1밀리리터를 세포 여과기에 피펫팅하고 예냉된 DMEM PLUS 4.5밀리리터를 추가하여 세포를 세척합니다. 해부
전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요