0 조회수 • 3:00 분 • July 8th, 2025
여러 개의 마이크로 홈을 통해 연결된 근위 및 원위 웰이 있는 폴리머 코팅 미세유체 챔버로 시작합니다.
근위 우물에 발달 중인 운동 뉴런이 풍부한 마우스 배아 척수 조직을 배치합니다.
영양 배지로 잘 보충하십시오. 뉴런 성장과 폴리머 코팅 표면에 대한 접착을 허용하기 위해 배양합니다.
나중에 성장 인자가 없는 영양 배지를 근위 우물에 추가합니다.
원위 우물에는 성장 인자를 포함하는 더 많은 양의 영양 배지를 추가하여 농도와 부피 차이를 만듭니다.
이러한 차이로 인해 더 긴 신경 돌출부인 축삭이 미세 홈을 통해 원위 우물을 향해 성장합니다.
형광 염료 용액을 두 웰 모두에 추가합니다.
염료 분자는 뉴런으로 들어가 양쪽 끝의 미토콘드리아와 산성 소기관을 염색합니다.
라이브 공초점 이미징에서 형광 염색된 소기관은 신경 세포체와 축삭 사이에서 양방향으로 이동하여 운동 뉴런의 축삭 수송을 확인합니다.
MFC의 근위 구획에서 모든 매체를 폐기하십시오. 총 4마이크로리터의 피펫으로 단일 척수 외식편을 집어 동굴에 최대한 가깝게 주입합니다. 측면 배출구를 통해 근위 우물에서 과도한 액체를 빼냅니다. 이전 단계를 두 번 더 반복하고 외식편이 근위 채널에 매립되었는지 확인합니다. 천천히 150마이크로리터의 SCEX 배지를 근위 웰에 첨가합니다.
도금 1일 후, 근위 구획의 SCEX 배지를 교체하고 원위 구획에 풍부한 SCEX 배지를 추가하여 원위 구획과 근위 웰 사이의 웰당 최소 15마이크로리터의 부피 구배를 유지합니다. 4-6일 후, 축삭은 원위 구획으로 교차하고 축삭 수송 영상을 위한 준비가 되어야 합니다.
미토콘드리아 및 산성 구획을 표지하려면 100나몰 Mitotracker 딥 레드 FM 및 100나몰 LysoTracker 레드로 신선한 SCEX 배지를 준비하고 미세유체 챔버에 첨가합니다. 섭씨 37도에서 30-60분 동안 배양한 다음 따뜻한 SCEX 배지로 세 번 세척합니다. 축삭 수송의 라이브 이미징을 진행하여 동영상당 총 5분씩 3초 간격으로 100시간 랩스 이미지 시리즈를 획득합니다.